目的與背景:缺氧誘導(dǎo)型轉(zhuǎn)錄因子-1（HIF-1）,是介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和組織適應(yīng)缺氧微環(huán)境的異二聚體轉(zhuǎn)錄因子,對腫瘤生長施加不同的影響的重要的癌癥標(biāo)志物。文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道HIF-1在多種病因引起的肝病發(fā)病機(jī)理中起作用。來源于唇形科植物的尾葉香茶菜因其抗炎、抗腫瘤作用備受關(guān)注,但其有效成分:二萜類化合物尾葉香茶菜素A以HIF-1α為作用靶標(biāo)的抗腫瘤作用機(jī)制尚不十分明確。因此,此次研究探討尾葉香茶菜素A對HIF-lα及其靶基因的影響。方法:首先,用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)以及細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn),檢測藥物對HIF-lα轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞毒性的影響。其次,免疫印跡分析實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)尾葉香茶菜素A對Hep3B/Sk-hepl細(xì)胞中HIF-lα的蛋白水平以及作用機(jī)制;接下來用免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證尾葉香茶菜素A對乏氧誘導(dǎo)的HIF-lα的蛋白細(xì)胞核內(nèi)的累積的影響。然后,RT-PCR驗(yàn)證尾葉香茶菜素A可對HIF-lα調(diào)控的靶基因VEGF mRNA的表達(dá)的影響。最后,MTT細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞集落實(shí)驗(yàn)、EdU實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)以及免疫印跡分析實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)尾葉香茶菜素A對肝癌細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果:熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)以及細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)... 

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞簡表
第一章 前言
    1.1 肝癌的介紹
        1.1.1 肝癌的發(fā)生率
        1.1.2 肝癌的治療手段
    1.2 缺氧和癌癥
    1.3 HIF的介紹
        1.3.1 HIF的結(jié)構(gòu)
        1.3.2 HIF-1α的降解
        1.3.3 HIF-1α的合成
        1.3.4 HIF-1α在癌癥中的作用
    1.4 尾葉香茶菜素A的介紹
第二章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    2.1 材料
        2.1.1 細(xì)胞株及來源
        2.1.2 藥物
        2.1.3 儀器
        2.1.4 試劑及抗體
        2.1.5 藥品及試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 復(fù)蘇細(xì)胞
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 MTT法檢測細(xì)胞存活率實(shí)驗(yàn)
        2.2.4 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)
        2.2.5 免疫印跡分析實(shí)驗(yàn)
        2.2.6 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 RT-PCR實(shí)驗(yàn)
        2.2.8 細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)
        2.2.9 Colony formation實(shí)驗(yàn)
        2.2.10 EdU檢測細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
第三章 結(jié)果
    3.1 尾葉香茶菜素A對肝癌細(xì)胞中HIF-1α表達(dá)的影響
        3.1.1 熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)結(jié)果
        3.1.2 細(xì)胞存活實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1.3 免疫印跡分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1.4 免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.2 尾葉香茶菜素A對肝癌細(xì)胞中HIF-1α調(diào)控的靶基因的影響
        3.2.1 尾葉香茶菜素A對肝癌細(xì)胞中VEGF表達(dá)的影響
        3.2.2 尾葉香茶菜素A對肝癌細(xì)胞增殖的影響
第四章 討論
第五章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Hypoxia inducible factor in hepatocellular carcinoma:A therapeutic target[J]. Daniel Lin,Jennifer Wu.  World Journal of Gastroenterology. 2015(42)
[2]肝癌綜合治療的現(xiàn)狀[J]. 郭武華,張吉翔.  世界華人消化雜志. 2008(20)
[3]Hepatocellular carcinoma: current management and recent advances[J]. Wan-Yee Lau,Eric C. H. Lai.  Hepatobiliary ＆ Pancreatic Diseases International. 2008(03)
[4]世界香茶菜屬植物地理分布及其藥用前景[J]. 陳林姣,李植華,賴小平.  中藥材. 1996(04)



本文編號：3707285