背景及目的:前期實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn),miRNA156在甘草水提物miRNA中豐度較高,并經(jīng)由細(xì)胞形態(tài)學(xué)、細(xì)胞增殖情況和免疫相關(guān)基因表達(dá)探索了甘草miRNA對人免疫細(xì)胞的影響。本研究從小鼠腸道菌群、淋巴細(xì)胞免疫基因表達(dá)、腸道組織轉(zhuǎn)錄組表達(dá)情況及腸道組織形態(tài)觀察探究甘草及其miRNA對小鼠的影響,為拓展中藥研究新方向奠定了基礎(chǔ)。方法:1、制取甘草水提物及對照組金銀花水提物,根據(jù)前期高通量測序結(jié)果中miRNA156序列,設(shè)計(jì)合成相應(yīng)的miRNA156 mimic及相應(yīng)的反轉(zhuǎn)錄及檢測引物,分別通過灌胃不同劑量甘草水提物、miRNA156mimic及尾靜脈注射miRNA156 mimic進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。眼球取血并離心獲得小鼠血清,利用qRT-PCR檢測血清中的miRNA。2、取小鼠新鮮糞便提取基因組DNA,進(jìn)行16S rDNA V4V5高變區(qū)測序,分析各組間門綱目科屬水平腸道菌群的差異,并通過α多樣性及β多樣性分析確定各組間關(guān)系及miRNA156在甘草中發(fā)揮的作用。3、取小鼠回腸片段,一部分液氮研磨提取RNA用于轉(zhuǎn)錄組測序并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,另外一部分樣品用4%多聚甲醛溶液進(jìn)行固定,HE染色,光學(xué)顯微... 

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
引言
第一章 甘草miRNA在小鼠血清中的檢測
    1.1 引言
    1.2 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2.1 樣本
        1.2.2 試劑
        1.2.3 儀器
        1.2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2.5 試劑配制
    1.3 實(shí)驗(yàn)方法
        1.3.1 動(dòng)物分組及給藥
        1.3.2 樣品收集
        1.3.3 血清中總RNA的提取
        1.3.4 目標(biāo)miRNA的RT-PCR檢測
        1.3.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定目標(biāo)miRNA
    1.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        1.4.1 小鼠體質(zhì)量結(jié)果
        1.4.2 甘草miRNA在血清中的檢測結(jié)果
    1.5 本章小結(jié)
第二章 甘草及其miRNA對小鼠腸道菌群的影響
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 樣本
        2.2.2 試劑
        2.2.3 儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 糞便基因組DNA提取
        2.3.2 樣品質(zhì)量檢測及PCR擴(kuò)增
        2.3.3 建庫測序和信息分析
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.4.1 基因組質(zhì)量檢測結(jié)果
        2.4.2 OTU及物種群落結(jié)構(gòu)
        2.4.3 Alpha多樣性分析
        2.4.4 Beta多樣性分析
    2.5 本章小結(jié)
第三章 甘草及其miRNA對小鼠腸道組織轉(zhuǎn)錄組的影響
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 樣本
        3.2.2 試劑
        3.2.3 儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 小鼠回腸組織總RNA提取
        3.3.2 樣品質(zhì)量檢測
        3.3.3 建庫測序
        3.3.4 生物信息學(xué)分析
        3.3.5 利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
        3.3.6 腸道組織切片HE染色
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.4.1 RNA質(zhì)量檢測結(jié)果
        3.4.2 測序數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)和評估
        3.4.3 基因表達(dá)分析
        3.4.4 基因差異表達(dá)分析
        3.4.5 差異表達(dá)基因GO富集分析
        3.4.6 差異表達(dá)基因KEGG Pathway功能分析
        3.4.7 利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果
        3.4.8 腸道組織HE染色病理結(jié)果
    3.5 本章小結(jié)
第四章 甘草及其miRNA對小鼠脾臟免疫相關(guān)基因的影響
    4.1 引言
    4.2 實(shí)驗(yàn)材料
        4.2.1 樣本
        4.2.2 試劑
        4.2.3 儀器
        4.2.4 免疫相關(guān)基因引物
    4.3 實(shí)驗(yàn)方法
        4.3.1 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞總RNA的提取
        4.3.2 小鼠脾臟RNA免疫相關(guān)基因的RT-PCR鑒定
        4.3.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測免疫基因的表達(dá)差異
    4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.4.1 小鼠脾臟淋巴細(xì)胞總RNA提取及免疫相關(guān)基因擴(kuò)增鑒定
        4.4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR得到的免疫相關(guān)基因的差異表達(dá)量
    4.5 本章小結(jié)
第五章 總結(jié)與展望
    5.1 總結(jié)
    5.2 展望
參考文獻(xiàn)
附錄1 轉(zhuǎn)錄組測序驗(yàn)證基因?qū)?yīng)通路
附錄2 轉(zhuǎn)錄組測序用于驗(yàn)證的基因測序表達(dá)量
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]趨化因子CXCL12/CXCR4與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 亓建波,馬家馳,郭慶金,陳曉昌,趙曉丹,龔珍強(qiáng),杜劍波.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2018(07)
[2]腸道菌群對腸道病毒感染的影響[J]. 王三元,董俊芳,彭宜紅.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2018(01)
[3]甘草水提物中miRNA對人免疫細(xì)胞基因表達(dá)的影響[J]. 向靜,黃潔嫦,徐暢,何免,徐鵬程,張丹,張文峰,沈晗,邵紅偉.  中國中藥雜志. 2017(09)
[4]中藥有效成分與腸道菌群相互作用的研究進(jìn)展[J]. 祖先鵬,林璋,謝海勝,楊鳥,劉心如,張衛(wèi)東.  中國中藥雜志. 2016(10)
[5]Bax基因及其產(chǎn)物對細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)[J]. 李彩萍.  當(dāng)代畜牧. 2016(11)
[6]中草藥免疫增強(qiáng)功能的研究進(jìn)展[J]. 阿地拉·艾皮熱,張富春,李金耀.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2016(03)
[7]甘草水煎劑中miRNA的提取及其對人外周血單個(gè)核細(xì)胞的影響研究[J]. 邵紅偉,何免,陳嘉斯,陳輝,向靜,黃樹林.  中藥材. 2015(07)
[8]甘草及其有效成分的藥效學(xué)研究進(jìn)展[J]. 張明,鄧毅.  西部中醫(yī)藥. 2015(04)
[9]IL-12p35和IL-12p40缺失可引起衣原體生殖道感染后腎臟病變[J]. 符璽宗,陳勝華,孫源彬,柏琴琴,蔡恒玲,周洲,陸春雪,陳麗麗.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2015 (02)
[10]中藥金銀花的研究進(jìn)展[J]. 王亞丹,楊建波,戴忠,馬雙成.  藥物分析雜志. 2014(11)

碩士論文
[1]胭脂魚CD79a和CD79b基因的克隆、表達(dá)及功能分析[D]. 李煥.西南大學(xué) 2017
[2]豬繁殖與呼吸綜合征模型中補(bǔ)體受體CR2 mRNA的表達(dá)水平分析[D]. 段孟波.山西農(nóng)業(yè)大學(xué) 2015
[3]SELL基因在中國漢族重型痤瘡分子水平的研究[D]. 鄭琪.昆明醫(yī)科大學(xué) 2015
[4]甘草水煎劑中miRNA的提取、高通量測序及對免疫細(xì)胞的影響研究[D]. 何免.廣東藥學(xué)院 2015



本文編號：3689245