目的:以神經(jīng)干細(xì)胞（Neural stem cells,NSCs）為供體細(xì)胞的細(xì)胞替代療法是目前研究帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）的熱點,也被認(rèn)為是潛力最大、臨床應(yīng)用前景最好的PD治療策略,隨著研究的深入發(fā)現(xiàn):移植的NSCs存活率極低,嚴(yán)重影響PD的長期療效。中藥在PD治療中有其獨特的優(yōu)勢,本實驗以6-羥基多巴胺（6-hydroxy dopamine,6-OHDA）建立的PD大鼠模型為研究對象,觀察龜羚帕安丸對PD大鼠NSCs移植后中腦黑質(zhì)TH、GDNF及Ptx3表達(dá)的影響,探索龜羚帕安丸對移植入PD大鼠腦內(nèi)的NSCs影響的可能作用機制,為臨床提高PD神經(jīng)干細(xì)胞移植的長期療效尋找新的方法。方法:選擇性成熟雌雄SD大鼠,按2:1合籠制備Ed16孕鼠,分離出胎鼠的海馬細(xì)胞,機械吹打法制備單細(xì)胞懸液,接種于神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)液（DMEM/F12、B27、EGF、bFGF、雙抗）中進行培養(yǎng)、傳代,并用免疫熒光法進行NSCs的Nestin鑒定。用神經(jīng)干細(xì)胞分化液（DMEM/F12、胎牛血清、B27、EGF、bFGF、雙抗）誘導(dǎo)NSCs貼壁分化。將鑒定完成的NSCs用BrdU... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
前言
實驗一 SD大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)與鑒定
    材料與方法
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要實驗試劑
            1.3 主要實驗儀器
            1.4 主要試劑配置
        2 實驗方法
            2.1 Ed16孕鼠制備
            2.2 神經(jīng)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)
            2.3 神經(jīng)干細(xì)胞Nestin鑒定
            2.4 神經(jīng)干細(xì)胞分化的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
            2.5 神經(jīng)干細(xì)胞Brdu標(biāo)記與檢測
    結(jié)果
        1 原代細(xì)胞培養(yǎng)觀察
        2 傳代細(xì)胞培養(yǎng)觀察
        3 神經(jīng)干細(xì)胞Nestin鑒定
        4 神經(jīng)干細(xì)胞分化的細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察
        5 神經(jīng)干細(xì)胞的BrdU標(biāo)記與檢測
    討論
        1 神經(jīng)干細(xì)胞分離與培養(yǎng)
        2 神經(jīng)干細(xì)胞Nestin鑒定
實驗二 龜羚帕安丸對PD大鼠NSCs移植后中腦黑質(zhì)TH、GDNF及Ptx3表達(dá)的影響
    材料與方法
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要實驗藥品與試劑
            1.3 主要實驗儀器
            1.4 主要試劑配置
        2 實驗方法
            2.1 技術(shù)路線圖
            2.2 PD大鼠模型建立
            2.3 帕金森病大鼠模型判定標(biāo)準(zhǔn)
            2.4 神經(jīng)干細(xì)胞移植
            2.5 實驗分組與處理
            2.6 指標(biāo)檢測
            2.7 統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 對各組大鼠行為學(xué)影響
        3 對各組大鼠紋狀體BrdU標(biāo)記的NSCs影響
        4 對各組大鼠中腦黑質(zhì)TH蛋白及mRNA表達(dá)影響
        5 對各組大鼠中腦黑質(zhì)GDNF及Ptx3蛋白表達(dá)影響
        6 TH與GDNF、Ptx3相關(guān)性分析
        7 中腦黑質(zhì)致密部HE染色觀察
    討論
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 中醫(yī)對帕金森病認(rèn)識
        3 龜羚帕安丸誘導(dǎo)移植NSCs分化為多DA能神經(jīng)元機制分析
        4 龜羚帕安丸對PD模型神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用機制
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄1 圖片
附錄2 綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄3 研究生期間發(fā)表論文及參與科研情況


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[2]補腎方劑誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化的理論和實驗研究[D]. 譚峰.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2011
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碩士論文
[1]龜羚帕安丸對帕金森病大鼠神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用的研究[D]. 寧亞紅.河南中醫(yī)學(xué)院 2015
[2]帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達(dá)變化的實驗研究[D]. 何珊.揚州大學(xué) 2014



本文編號：3686429