目的:以神經(jīng)干細胞（Neural stem cells,NSCs）為供體細胞的細胞替代療法是目前研究帕金森�。≒arkinson’s disease,PD）的熱點,也被認為是潛力最大、臨床應用前景最好的PD治療策略,隨著研究的深入發(fā)現(xiàn):移植的NSCs存活率極低,嚴重影響PD的長期療效。中藥在PD治療中有其獨特的優(yōu)勢,本實驗以6-羥基多巴胺（6-hydroxy dopamine,6-OHDA）建立的PD大鼠模型為研究對象,觀察龜羚帕安丸對PD大鼠NSCs移植后中腦黑質(zhì)TH、GDNF及Ptx3表達的影響,探索龜羚帕安丸對移植入PD大鼠腦內(nèi)的NSCs影響的可能作用機制,為臨床提高PD神經(jīng)干細胞移植的長期療效尋找新的方法。方法:選擇性成熟雌雄SD大鼠,按2:1合籠制備Ed16孕鼠,分離出胎鼠的海馬細胞,機械吹打法制備單細胞懸液,接種于神經(jīng)干細胞培養(yǎng)液（DMEM/F12、B27、EGF、bFGF、雙抗）中進行培養(yǎng)、傳代,并用免疫熒光法進行NSCs的Nestin鑒定。用神經(jīng)干細胞分化液（DMEM/F12、胎牛血清、B27、EGF、bFGF、雙抗）誘導NSCs貼壁分化。將鑒定完成的NSCs用BrdU... 

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞
前言
實驗一 SD大鼠神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)與鑒定
    材料與方法
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要實驗試劑
            1.3 主要實驗儀器
            1.4 主要試劑配置
        2 實驗方法
            2.1 Ed16孕鼠制備
            2.2 神經(jīng)干細胞分離與培養(yǎng)
            2.3 神經(jīng)干細胞Nestin鑒定
            2.4 神經(jīng)干細胞分化的細胞形態(tài)學觀察
            2.5 神經(jīng)干細胞Brdu標記與檢測
    結(jié)果
        1 原代細胞培養(yǎng)觀察
        2 傳代細胞培養(yǎng)觀察
        3 神經(jīng)干細胞Nestin鑒定
        4 神經(jīng)干細胞分化的細胞形態(tài)學觀察
        5 神經(jīng)干細胞的BrdU標記與檢測
    討論
        1 神經(jīng)干細胞分離與培養(yǎng)
        2 神經(jīng)干細胞Nestin鑒定
實驗二 龜羚帕安丸對PD大鼠NSCs移植后中腦黑質(zhì)TH、GDNF及Ptx3表達的影響
    材料與方法
        1 實驗材料
            1.1 實驗動物
            1.2 主要實驗藥品與試劑
            1.3 主要實驗儀器
            1.4 主要試劑配置
        2 實驗方法
            2.1 技術(shù)路線圖
            2.2 PD大鼠模型建立
            2.3 帕金森病大鼠模型判定標準
            2.4 神經(jīng)干細胞移植
            2.5 實驗分組與處理
            2.6 指標檢測
            2.7 統(tǒng)計分析
    結(jié)果
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 對各組大鼠行為學影響
        3 對各組大鼠紋狀體BrdU標記的NSCs影響
        4 對各組大鼠中腦黑質(zhì)TH蛋白及mRNA表達影響
        5 對各組大鼠中腦黑質(zhì)GDNF及Ptx3蛋白表達影響
        6 TH與GDNF、Ptx3相關(guān)性分析
        7 中腦黑質(zhì)致密部HE染色觀察
    討論
        1 帕金森病大鼠模型建立
        2 中醫(yī)對帕金森病認識
        3 龜羚帕安丸誘導移植NSCs分化為多DA能神經(jīng)元機制分析
        4 龜羚帕安丸對PD模型神經(jīng)干細胞誘導分化作用機制
結(jié)論
參考文獻
致謝
附錄1 圖片
附錄2 綜述
    參考文獻
附錄3 研究生期間發(fā)表論文及參與科研情況


【參考文獻】：
期刊論文
[1]龜羚帕安丸對PD大鼠中腦黑質(zhì)IL-1β、iNOS、IL-6、IFN-γ表達的影響[J]. 常學輝,張良芝,寧亞紅.  時珍國醫(yī)國藥. 2017(01)
[2]龜羚帕安丸對PD大鼠中腦黑質(zhì)Caspase-3、SYN表達及行為學的影響[J]. 張良芝,常學輝,寧亞紅.  中華中醫(yī)藥學刊. 2016(11)
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[8]GDNF基因修飾神經(jīng)干細胞移植治療大鼠帕金森病[J]. 段奎甲,王向鵬,楊智勇,王波,王明國,張海龍,鄧興力.  南方醫(yī)科大學學報. 2016(01)
[9]龜羚帕安丸在帕金森病中的應用[J]. 孟毅,李莉,李永亮.  河南中醫(yī). 2016(01)
[10]Brdu標記的rBMSCs在大鼠體內(nèi)的遷移[J]. 許偉,謝興文,趙永利,李寧,徐世紅,宋敏.  中國骨質(zhì)疏松雜志. 2015(04)

博士論文
[1]中藥復方誘導骨髓間充質(zhì)干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的實驗研究[D]. 林硯銘.成都中醫(yī)藥大學 2013
[2]補腎方劑誘導骨髓間充質(zhì)干細胞增殖分化的理論和實驗研究[D]. 譚峰.南京中醫(yī)藥大學 2011
[3]神經(jīng)干細胞聯(lián)合多巴胺神經(jīng)元移植治療帕金森病的實驗研究[D]. 鄧興力.昆明醫(yī)學院 2008

碩士論文
[1]龜羚帕安丸對帕金森病大鼠神經(jīng)干細胞誘導分化作用的研究[D]. 寧亞紅.河南中醫(yī)學院 2015
[2]帕金森病模型大鼠腦內(nèi)TH表達變化的實驗研究[D]. 何珊.揚州大學 2014



本文編號：3686429