目的:在小鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞N2a（N2a/WT）及穩(wěn)定表達(dá)人源APP695的N2a（N2a/APP695）細(xì)胞的AD細(xì)胞模型中,研究開心散和開心散加味新及開心散加味新方中幾種不同單體對N2a/APP695細(xì)胞中淀粉樣前體蛋白（APP）的影響;選取目標(biāo)單體,研究其對N2a/APP695細(xì)胞中APP、相關(guān)分泌酶（ADAM10、BACE1、PSEN1）、酶解產(chǎn)物（β-CTF、Aβ）的影響及相關(guān)分子機制;在N2a/APP695細(xì)胞及LPS誘導(dǎo)的N2a/WT和BV2細(xì)胞炎癥模型中,觀察其對炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA水平影響。方法:用含有一系列濃度開心散和開心散加味新方水提液以及丹參素、隱丹參酮、丹酚酸A、川芎嗪和鹽酸川芎嗪溶液的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)N2a/APP695細(xì)胞24h后,采用Westernblot檢測細(xì)胞中APP含量變化,篩選目標(biāo)單體（丹參素）。用含有不同濃度丹參素溶液的培養(yǎng)基培養(yǎng)分別N2a/APP695細(xì)胞24h后,CCK-8法檢測細(xì)胞活性;Western blot檢測細(xì)胞中APP、ADAM10、BACE1、PSEN1、β-CTF、p-Akt/Akt、p-PI3K/... 

【文章頁數(shù)】：78 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
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縮略詞
第一章 前言
    1.1 阿爾茲海默病
        1.1.1 阿爾茲海默病概況
        1.1.2 導(dǎo)致AD的因素
        1.1.3 AD的細(xì)胞與分子致病機理
        1.1.4 Aβ的神經(jīng)毒性
    1.2 阿爾茲海默病與炎癥
        1.2.1 Aβ的致炎作用
        1.2.2 小膠質(zhì)細(xì)胞與炎癥
        1.2.3 炎性因子在AD中的作用
    1.3 開心散與AD
        1.3.1 開心散抗癡呆研究
        1.3.2 人參中人參皂苷的抗癡呆作用研究
        1.3.3 遠(yuǎn)志中寡糖酯及遠(yuǎn)志皂苷的抗癡呆作用研究
        1.3.4 石菖蒲的抗癡呆作用研究
        1.3.5 茯苓的抗癡呆作用研究
        1.3.6 川芎的抗癡呆作用研究
        1.3.7 丹參的抗癡呆作用研究
        1.3.8 巴戟天的抗癡呆作用研究
    1.4 本論文研究的內(nèi)容與意義
    1.5 本論文擬解決的主要問題
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 試劑及抗體
        2.1.2 細(xì)胞株
        2.1.3 實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 溶液配制
        2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2.3 實驗分組
        2.2.4 CCK-8法測定細(xì)胞活性
        2.2.5 SDS-PAGE和蛋白質(zhì)免疫印跡
        2.2.6 細(xì)胞總RNA提取
        2.2.7 RT-PCR
        2.2.8 免疫熒光
    2.3 數(shù)據(jù)處理
第三章 實驗結(jié)果
    3.1 N2a/WT與N2a/APP695細(xì)胞形態(tài)
    3.2 開心散及開心散加味新方水提液對N2a/WT和N2a/APP695細(xì)胞活性影響
    3.3 開心散及開心散加味新方水提液對N2a/APP695細(xì)胞中APP和BACE1表達(dá)響
    3.4 開心散加味新方中不同單體對N2a/APP695細(xì)胞APP含量影響
    3.5 丹參素對N2a/WT和N2a/APP695細(xì)胞活性影響
    3.6 丹參素對N2a/APP695細(xì)胞中APP、ADAM10、BACE1、PSEN1和β-CTF影響
    3.7 丹參素對N2a/APP695細(xì)胞內(nèi)APP、ADAM10、BACE1和PSEN1mRNA水平影響
    3.8 免疫熒光研究丹參素對N2a/APP695細(xì)胞中APP和BACE1影響
    3.9 免疫熒光研究丹參素對N2a/APP695細(xì)胞中Aβ表達(dá)影響
    3.10 丹參素通過激活N2a/APP695細(xì)胞中PI3K/Akt通路減少BACE1產(chǎn)生
    3.11 丹參素對N2a/APP695細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影響
    3.12 丹參素對LPS誘導(dǎo)的N2a/WT細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影
    3.13 丹參素對LPS誘導(dǎo)的BV2細(xì)胞IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA水平影響
第四章 討論
    4.1 開心散及開心散加味新方對AD的治療作用
    4.2 中藥單體及AD細(xì)胞模型的選取
    4.3 丹參素對APP、BACE1和Aβ的影響
    4.4 丹參素通過激活PI3K/Akt通路降低BACE1產(chǎn)生
    4.5 丹參素的抗炎作用
    4.6 開心散加味新方及丹參素治療AD的前景
結(jié)論與展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]川芎嗪對阿爾茨海默病大鼠學(xué)習(xí)記憶能力和細(xì)胞周期蛋白E、P21表達(dá)的影響[J]. 尹淑杰,張濤,榮光影,宋慶嬌,汪悅,柳朝陽.  中國老年學(xué)雜志. 2016(20)
[2]川芎嗪藥理作用研究進(jìn)展[J]. 姜宇懋,王丹巧.  中國現(xiàn)代中藥. 2016(10)
[3]川芎嗪抗β淀粉樣蛋白25～35誘導(dǎo)的SH-SY5Y細(xì)胞凋亡作用的機制[J]. 尹淑杰,柳朝陽,任永波,宋慶嬌,張濤.  中國老年學(xué)雜志. 2016(17)
[4]JNK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在丹參酮ⅡA抗大鼠神經(jīng)病理性疼痛中的作用[J]. 游言文,徐玉英,任秀花,張艷霞.  中醫(yī)學(xué)報. 2016(06)
[5]丹參酮ⅡA對缺血性腦損傷大鼠的保護(hù)作用及機制初探[J]. 趙巖.  光明中醫(yī). 2016(10)
[6]6首開心散類方對阿爾茲海默病模型小鼠的藥理作用及機制研究[J]. 李牧函,張靜,趙潤清,董憲喆,胡園,陳婷,李潔,劉俐,劉屏.  中國中藥雜志. 2016(07)
[7]丹參川芎嗪注射液對Aβ?lián)p傷的PC12細(xì)胞保護(hù)作用及機制研究[J]. 嚴(yán)鋼莉,李朝武,聶海嶺,黎逢光,成勇,毛高峰,方煌,魏海燕,謝軍.  卒中與神經(jīng)疾病. 2016(01)
[8]Ginsenoside Rg1 protects against neurodegeneration by inducing neurite outgrowth in cultured hippocampal neurons[J]. Liang Huang,Li-feng Liu,Juan Liu,Ling Dou,Ge-ying Wang,Xiao-qing Liu,Qiong-lan Yuan.  Neural Regeneration Research. 2016(02)
[9]丹參酮IIA對AD大鼠腦組織p53,pp53表達(dá)及細(xì)胞凋亡的影響[J]. 李建,王芳,周軍,李聞文.  中南大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2015(11)
[10]巴戟天對小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響[J]. 葉志雄,肖柳英,潘競鏘.  廣州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2015(02)

博士論文
[1]ApoE4通過影響NMDA受體功能加劇5XFAD小鼠認(rèn)知功能障礙[D]. 劉德山.福建醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號：3661584