目的探討柚皮苷通過調(diào)控mi R-199a-5p/ECE1分子軸對骨損傷修復(fù)的影響。方法 Western blotting檢測ECE1及成骨分化相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)水平;RT-qPCR檢測mi RNAs相對表達(dá)水平;雙熒光素酶報告基因驗證mi R-199a-5p和ECE1靶向關(guān)系;MTT檢測MC3T3-E1細(xì)胞增殖活力;堿性磷酸酶（ALP）檢測MC3T3-E1細(xì)胞成骨分化能力;茜素紅染色檢測MC3T3-E1細(xì)胞礦化情況。結(jié)果柚皮苷處理顯著促進(jìn)MC3T3-E1細(xì)胞增殖活力、成骨分化指標(biāo)Runx2、OPN、BMPs、OC等的表達(dá)、ALP活性以及細(xì)胞鈣化能力水平（P<0.01）。其中20ng/m L濃度處理的效果最優(yōu)。RT-qPCR檢測結(jié)果顯示,柚皮苷能顯著上調(diào)mi R-199a-5p的表達(dá)水平。雙熒光素酶報告基因檢測結(jié)果表明ECE1是mi R-199a-5p的一個靶基因;并且,mi R-199a-5p靶向下調(diào)ECE1的表達(dá)。進(jìn)一步實驗表明,敲降mi R-199a-5p顯著降低柚皮苷對MC3T3-E1細(xì)胞增殖活力、ALP活性和鈣礦化的促進(jìn)作用（P<0.01）;敲降ECE1顯著促進(jìn)了柚皮... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2020,41(06)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗材料
    1.2 實驗方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.3 We s te rn blotting檢測MC3T3-E1細(xì)胞中蛋白表達(dá)水平
        1.2.4 MTT檢測MC3T3-E1細(xì)胞增殖活力
        1.2.5 RT-qP CR檢測miRNAs表達(dá)
        1.2.6 雙熒光素酶報告基因檢測miR-199a-5p和ECE1靶向關(guān)系
        1.2.7 MC3T3-E1細(xì)胞ALP活性檢測
        1.2.8 茜素紅染色檢測MC3T3-E1細(xì)胞礦化情況
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 柚皮苷促進(jìn)骨損傷修復(fù)
    2.2 柚皮苷上調(diào)MC3T3-E1細(xì)胞中miR-199a-5p表達(dá)
    2.3 miR-199a-5p靶向下調(diào)ECE1表達(dá)
    2.4 柚皮苷通過調(diào)控miR-199a-5p/ECE1分子軸促進(jìn)骨損傷修復(fù)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]丹參作用于內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶的活性成分虛擬篩選[J]. 陳少軍,崔明超,陳宏降.  中國實驗方劑學(xué)雜志. 2014(14)
[2]血管內(nèi)皮生長因子緩釋系統(tǒng)復(fù)合成骨誘導(dǎo)的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)骨缺損[J]. 徐曉峰,王明偉,潘鑫,劉小平,張志堅.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2011(34)

博士論文
[1]生物可降解纖維支架與miR-495在骨和軟骨損傷修復(fù)上的應(yīng)用研究[D]. 趙星宇.吉林大學(xué) 2019
[2]糖皮質(zhì)激素對大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮細(xì)胞miRNAs表達(dá)譜的影響及淫羊藿苷的保護(hù)作用[D]. 岳聚安.北京中醫(yī)藥大學(xué) 2018

碩士論文
[1]柚皮苷在共培養(yǎng)體系下對成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞以及內(nèi)皮祖細(xì)胞的影響及其機(jī)制研究[D]. 趙志虎.天津醫(yī)科大學(xué) 2017
[2]印記基因（H19、Grb10）和miR-675對骨損傷愈合骨細(xì)胞增殖與分化的影響[D]. 姚軍威.武漢體育學(xué)院 2016



本文編號：3644879