目的:構(gòu)建地烏藥材基原物種系統(tǒng)鑒定體系,并對全國16個產(chǎn)地的地烏藥材進行綜合品質(zhì)評價,為地烏藥材產(chǎn)地選擇及臨床用藥安全奠定基礎(chǔ)。方法:使用傳統(tǒng)鑒別方法結(jié)合DNA條形碼核糖體DNA第二內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)（ITS2）序列分子鑒定技術(shù)快速鑒別地烏藥材真?zhèn)?并基于HPLC-UV對地烏藥材中5個有效成分進行含量測定,采用Welch Ultimate XB-C18色譜柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流動相乙腈-0.01%三氟乙酸溶液（30∶70）,檢測波長210 nm,柱溫30℃,流速1.0 mL·min-1。結(jié)果:傳統(tǒng)鑒別及DNA條形碼快速鑒別技術(shù)均能準(zhǔn)確鑒別地烏藥材真?zhèn)巍LAST比對分析發(fā)現(xiàn),16個產(chǎn)地地烏藥材均與林蔭銀蓮花Anemone flaccida具有最大相似度;基于多指標(biāo)成分含量測定表明湖北恩施板橋鎮(zhèn)的地烏藥材中5個三萜皂苷類成分含量之和最高（10.59%）,其次為貴州畢節(jié)赫章（6.28%）和湖北長陽都鎮(zhèn)灣（5.64%）。結(jié)論:DNA條形碼技術(shù)可作為地烏藥材傳統(tǒng)鑒定技術(shù)的有效補充,該鑒別體系可保障地烏藥材基原準(zhǔn)確及臨床用藥安全。HPLC多指標(biāo)成分綜合評價及聚類分析結(jié)果表明在本... 

【文章來源】：中國實驗方劑學(xué)雜志. 2020,26(20)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

地烏樣品信息及性狀特征

所有藥材樣品采用常規(guī)的石蠟切片法制片，使用番紅-固綠混合染色后，用加拿大樹膠封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察地烏藥材橫切面，見圖2(A）。結(jié)果表明其根莖的表皮細(xì)胞扁平，外壁厚且木化；皮層薄壁細(xì)胞類圓形，為20余列；維管束外韌型，成環(huán)分布；髓部大，細(xì)胞類圓形。采用粉末制片法制備藥材水合氯醛-稀甘油透化裝片，在光學(xué)顯微鏡下觀察地烏藥材粉末，見圖2(B）。結(jié)果可觀察到棕色或黃色的表皮細(xì)胞；薄壁細(xì)胞常呈破碎狀，且細(xì)胞壁較厚，呈不均勻的連珠狀；非腺毛均為單細(xì)胞，其表面可見螺旋狀裂隙；導(dǎo)管為梯紋、網(wǎng)紋及螺紋導(dǎo)管；淀粉粒多種。上述結(jié)果均與2018年版《湖北省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[17]中地烏藥材顯微鑒別特征一致。2.1.3 理化鑒別

采用ITS2通用引物對地烏藥材樣品基因組總DNA進行PCR擴增[19]。25μL的PCR反應(yīng)體系：2×Es Taq MasterMix 12.5μL，引物對ITS2(ITS2-2F:5"-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3";ITS2-3R:5"-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3"）各1μL，模板DNA 2μL，滅菌超純水8.5μL。設(shè)置未加模板DNA（以滅菌超純水代替）的PCR反應(yīng)為陰性對照。ITS2序列擴增程序為94℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s,56℃退火30 s,72℃延伸45 s,35～40個循環(huán)；72℃延伸10 min。應(yīng)用瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR擴增產(chǎn)物，所有樣品PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳后均在500 bp處顯示單一明亮條帶，PCR擴增成功率100%。PCR產(chǎn)物送至生工生物工程（上海）股份有限公司測序，測序成功率100%，經(jīng)CondonCode Aligner V4.2.4軟件去除兩端5.8S和28S區(qū)段[22]，獲得ITS2間隔區(qū)序列。經(jīng)MEGA 7.0軟件[23]序列比對分析后，所有樣品ITS2序列長度均為211 bp,GC(G表示鳥嘌呤，C表示胞嘧啶）質(zhì)量分?jǐn)?shù)均為52.6%，共存在1個變異位點，為66位點G-C變異[陜西寶雞眉縣（SBM）]，其主導(dǎo)單倍型序列特征見圖3。2.2.3 局部序列比對基本檢索工具（BLAST）比對

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號：3608438