目的觀察不同濃度的丹參酮兩種主要的單體成分隱丹參酮、丹參酮ⅡA對體外原代培養(yǎng)的SD大鼠瞼板腺上皮細(xì)胞增殖、分化及脂質(zhì)合成的影響;探討丹參酮用于臨床治療瞼板腺功能障礙（Meibomian Gland Dysfunction,MGD）的可行性及其作用機制。方法運用單細(xì)胞消化法,取SD大鼠瞼板腺組織用Ⅳ型膠原酶消化并吹打成單個細(xì)胞后,與3T3細(xì)胞一起進(jìn)行體外原代細(xì)胞培養(yǎng),取培養(yǎng)7天左右已有克隆形成的原代細(xì)胞,實驗組分別加入濃度為0.125、0.25、0.5、1.25、2.5、5.0umol/L的隱丹參酮、丹參酮ⅡA,對照組加入5.0umol/L的DMSO,繼續(xù)培養(yǎng)48h后,用結(jié)晶紫染色和油紅染色檢測瞼板腺上皮細(xì)胞的克隆形成率和脂質(zhì)合成情況,實時熒光定量PCR檢測KRT16（角蛋白16）,Ki67（細(xì)胞增殖相關(guān)抗原）以及C/EBPα（CCAAT增強子結(jié)合蛋白）的表達(dá)。結(jié)果1、原代培養(yǎng)的瞼板腺細(xì)胞在倒置顯微鏡下觀察,第4-5開始有克隆形成,在6-7天時克隆細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)形式增長;2、PCR檢測結(jié)果:（1）濃度為0.125、0.25、0.5、1.25、2.5、5.0umol/L的隱丹參酮作用于瞼板... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

顯微鏡下分離瞼板腺組織

3.2 瞼板腺細(xì)胞的原代培養(yǎng)瞼板腺組織用Ⅳ型膠原酶消化 4 小時后，倒置顯微鏡下可見瞼板腺細(xì)胞與基質(zhì)分離，棄消化液，1x 的 PBS 沖洗 2 遍后，再加入 0.05%EDTA 將瞼板腺細(xì)胞團塊消化成單個細(xì)胞，與 3T3 細(xì)胞混合接種，24 小時后觀察培養(yǎng)基是否清亮，有無渾濁及漂浮物。混合接種 24 小時后可見 3T3 細(xì)胞形成網(wǎng)狀約鋪滿培養(yǎng)板（圖 2），瞼板腺細(xì)胞均勻分散在 3T3 形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上，第 4-5 天瞼板腺細(xì)胞開始有克隆形成，推擠鋪板的 3T3 細(xì)胞至周邊形成小的克隆圈（圖 4-5）。第 6-7 天克隆細(xì)胞數(shù)量明顯增加，克隆細(xì)胞圈面積顯著增大。隨后克隆細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)形式增長（圖6-7），不同克隆圈之間相互接觸之后，融合細(xì)胞生長速度逐漸減慢，部分停止生長，死亡細(xì)胞懸浮于克隆的貼壁細(xì)胞上層培養(yǎng)基中。

3.2 瞼板腺細(xì)胞的原代培養(yǎng)瞼板腺組織用Ⅳ型膠原酶消化 4 小時后，倒置顯微鏡下可見瞼板腺細(xì)胞與基質(zhì)分離，棄消化液，1x 的 PBS 沖洗 2 遍后，再加入 0.05%EDTA 將瞼板腺細(xì)胞團塊消化成單個細(xì)胞，與 3T3 細(xì)胞混合接種，24 小時后觀察培養(yǎng)基是否清亮，有無渾濁及漂浮物�；旌辖臃N 24 小時后可見 3T3 細(xì)胞形成網(wǎng)狀約鋪滿培養(yǎng)板（圖 2），瞼板腺細(xì)胞均勻分散在 3T3 形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)上，第 4-5 天瞼板腺細(xì)胞開始有克隆形成，推擠鋪板的 3T3 細(xì)胞至周邊形成小的克隆圈（圖 4-5）。第 6-7 天克隆細(xì)胞數(shù)量明顯增加，克隆細(xì)胞圈面積顯著增大。隨后克隆細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)形式增長（圖6-7），不同克隆圈之間相互接觸之后，融合細(xì)胞生長速度逐漸減慢，部分停止生長，死亡細(xì)胞懸浮于克隆的貼壁細(xì)胞上層培養(yǎng)基中。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]小鼠3T3-L1前脂肪細(xì)胞培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化方法的建立[J]. 郭秀玲,徐民崗,張秀麗,師磊,陳顯久.  中國藥物與臨床. 2013(12)
[2]丹參酮對人皮脂腺細(xì)胞增殖、脂質(zhì)合成及雄性激素受體mRNA表達(dá)的影響[J]. 鞠強,尹興平,石繼海,辛燕,康曉靜,陳沄,崔盤根,曹元華,夏隆慶.  中華皮膚科雜志. 2005(02)



本文編號：3598889