目的:本課題選用課題組前期篩選出的人口腔鱗癌耐藥細(xì)胞株KB/ADM及其親本細(xì)胞KB進(jìn)行實(shí)驗(yàn),研究氯化兩面針堿（NC）對(duì)KB/ADM細(xì)胞的耐藥逆轉(zhuǎn)作用及NC對(duì)PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路中相關(guān)基因及關(guān)鍵蛋白表達(dá)的影響,探討NC逆轉(zhuǎn)作用是否與PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路有關(guān)。方法:（1）人口腔鱗癌多藥耐藥細(xì)胞的培養(yǎng)和鑒定:（1）MTT法測(cè)定KB/ADM及KB細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性,配制阿霉素（ADM）、依托泊苷（VP-16）和長春新堿（VCR）各六個(gè)濃度組分別為200、100、50、25、10、5mg/L,計(jì)算細(xì)胞的IC50和耐藥倍數(shù)。（2）Real-time PCR檢測(cè)MDR1基因的表達(dá);（3）流式細(xì)胞儀檢測(cè)P-gp蛋白的表達(dá)。（2）NC逆轉(zhuǎn)人口腔鱗癌多藥耐藥細(xì)胞耐藥性的研究:（1）MTT法測(cè)定NC對(duì)KB/ADM的耐藥逆轉(zhuǎn)作用,實(shí)驗(yàn)分為KB空白對(duì)照組、KB+VP-16組、KB/ADM空白對(duì)照組、KB/ADM+VP-16組、KB/ADM+VP-16+VRP組、KB/ADM+VP-16+NC組,加藥組每組設(shè)5個(gè)不同濃度（200、100、50、25、10mg/L）,計(jì)算細(xì)胞的IC5... 

【文章來源】：廣西中醫(yī)藥大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

KB/ADM及KB細(xì)胞MDR1基因的相對(duì)表達(dá)(xs,n=3)

圖 2 KB/ADM 及 KB 細(xì)胞 P-gp 蛋白的相對(duì)表達(dá)Figure2 The P-gp expression of KB/ADM and KB cells4 討論在腫瘤 MDR 的多種機(jī)制中，腫瘤細(xì)胞 P-gp 的過度表達(dá)被認(rèn)為是化療耐藥最重要、也是研究最深入的耐藥機(jī)制[26]。在一般敏感細(xì)胞通常會(huì)檢測(cè)不到 P-gp，而 P-gp 在腫瘤 MDR 細(xì)胞株中卻有高水平的，就是因?yàn)槌掷m(xù)高表達(dá)進(jìn)而使細(xì)胞內(nèi)化療藥物排出，從而起到降低細(xì)內(nèi)化療藥物濃度的作用，P-gp 使細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度始終維持在較低平，造成腫瘤多藥耐藥[30]。采用 MDR 腫瘤細(xì)胞進(jìn)行研究之前，應(yīng)當(dāng)對(duì)所選耐藥細(xì)胞株的耐藥性進(jìn)行鑒別，這些前期準(zhǔn)備對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的可KB KB/ADM

(13.15±1.53)% 、 (15.18±1.41)% 、 (13.84±2.58)% 和 (12.59±2.28)% ， 與KB/ADM 空白組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在劃痕 48h 后，KB 空白組、KB25mg/LVP-16 組及 KB100mg/LVP-16 組的遷移率分別為(30.51±0.88)%、(40.89±0.05)%和(23.17±1.49)%，與 KB 空白組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；劃痕 48h 后的 KB/ADM 空白組、KB/ADM25mg/LVP-16、KB/ADM25mg/LVP-16+VRP 及 KB/ADM25mg/LVP-16+NC 遷移率分別為(29.83±1.78)% 、 (28.05±1.05)% 、 (17.45±1.82)% 和 (14.12±0.26)% ， 與KB/ADM 空白組比較具有顯著差異(P<0.01)。以上結(jié)果顯示，NC 對(duì)KB/ADM 細(xì)胞的遷移有抑制作用。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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