[目的]通過觀察抵擋湯在高糖、高糖波動環(huán)境下對人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）共激活因子1α（PGC-1α）、內(nèi)皮細(xì)胞型一氧化氮合酶（eNOS）、半胱氨酸天門冬氨酸特異性蛋白酶3（caspase-3）表達的影響,探討抵擋湯對血管內(nèi)皮細(xì)胞保護作用。[方法]模擬高糖、高糖波動環(huán)境培養(yǎng)HUVECs并分別進行抵擋湯、辛伐他汀、二甲雙胍干預(yù),各組培養(yǎng)48 h后,蛋白免疫印跡（Western Blot）檢測p-AMPK、PGC-1α、eNOS蛋白表達,逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）檢測caspase-3基因含量,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。[結(jié)果]高糖組、高糖波動組p-AMPK、PGC-1α、eNOS表達均顯著下降,且以高糖波動組最低。抵擋湯干預(yù)后p-AMPK、PGC-1α、eNOS表達均顯著上調(diào),與二甲雙胍干預(yù)無差異。高糖組、高糖波動組caspase-3 mRNA表達均明顯升高,抵擋湯干預(yù)后均明顯降低,且與二甲雙胍干預(yù)組無差異。[結(jié)論]抵擋湯在高糖、高糖波動環(huán)境下均可磷酸化AMPK,上調(diào)PGC-1α、e... 

【文章來源】：天津中醫(yī)藥. 2020,37(07)

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【部分圖文】：

Western blot檢測各組p-AMPK、PGC-1α、eNOS蛋白表達情況

與NG相比，HG組和FG組均可促進細(xì)胞凋亡（P<0.05），且以FG組凋亡率較高（P<0.05）。高糖各干預(yù)組中，HG-D組細(xì)胞凋亡率低于HG、HG-S組（P<0.05），且與HG-M組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。高糖波動各干預(yù)組中，F(xiàn)G-D組細(xì)胞凋亡率低于FD、FG-S組（P<0.05），且與FG-M組比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。提示抵擋湯干預(yù)可削弱高糖、高糖波動對細(xì)胞的促凋亡作用，其抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡作用優(yōu)于辛伐他汀，與鹽酸二甲雙胍比較無統(tǒng)計學(xué)差異。見圖3。3 討論

糖尿病大血管病變作為糖尿病慢性并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響患者的生存質(zhì)量，是致死、致殘的主要因素。血管內(nèi)皮是由血管內(nèi)皮細(xì)胞通過細(xì)胞間的連接而形成的單細(xì)胞層屏障，糖尿病大血管病變中，內(nèi)皮細(xì)胞是高血糖損傷的重要靶點，高血糖可導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷和凋亡，血管內(nèi)皮完整性和血管功能破壞。研究顯示，與無大血管并發(fā)癥的糖尿病患者相比，合并大血管病變的糖尿病患者的血糖標(biāo)準(zhǔn)差、平均血糖波動幅度、最大血糖波動幅度均明顯增高[10]。高糖波動較持續(xù)性高糖更易導(dǎo)致血管損傷，對其機制研究多涉及氧化應(yīng)激、細(xì)胞凋亡、炎癥、止血凝血等[11-13]。本研究顯示，相比與持續(xù)性高糖環(huán)境，高糖波動環(huán)境更能損傷內(nèi)皮細(xì)胞，促進其凋亡，與既往研究結(jié)果一致。線粒體的結(jié)構(gòu)和功能變化是細(xì)胞凋亡的樞紐環(huán)節(jié)，過量的活性氧簇（ROS）能引發(fā)內(nèi)源性細(xì)胞凋亡途徑[14-15]。線粒體作為細(xì)胞能量代謝的場所，是細(xì)胞內(nèi)三磷酸腺苷（ATP）的主要生產(chǎn)中心。AMPK作為細(xì)胞能量代謝的主要調(diào)控者，其活性受一磷酸腺苷（AMP）/ATP比值調(diào)控，線粒體抑制、營養(yǎng)匱乏和運動等多種生理條件都能激活A(yù)MPK。越來越多的證據(jù)表明，AMPK是合成線粒體、維持線粒體穩(wěn)態(tài)的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，通過調(diào)節(jié)下游信號通路來維持線粒體的最佳狀態(tài)[16]。AMPK還可通過促進游離脂肪酸（FFA）的氧化從而拮抗FFA造成的內(nèi)皮細(xì)胞毒性，進而保護血管內(nèi)皮[17]。PGC-1α是AMPK下游效應(yīng)物，在能量壓力下，AMPK可激活PGC-1α，通過與PPARγ或雌激素相關(guān)受體（ERRs）相互作用激活線粒體生物合成的基因，這一途徑被認(rèn)為可能是修復(fù)和維持血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體功能的一項主要機制[18]。eNOS廣泛存在于內(nèi)皮細(xì)胞中，其激活可改善內(nèi)皮和血管功能，可通過調(diào)控內(nèi)皮源性一氧化氮產(chǎn)生的關(guān)鍵酶，促進細(xì)胞增殖、黏附、遷移和血管新生[19]，另外在循環(huán)系統(tǒng)中eNOS是AMPK的一個重要靶標(biāo)。Caspase家族在細(xì)胞凋亡轉(zhuǎn)導(dǎo)通路尤其是線粒體途徑中起到至關(guān)重要的調(diào)控作用，其中caspase-3在凋亡過程中占據(jù)核心地位，被稱為“死亡執(zhí)行蛋白酶”，其激活標(biāo)志著細(xì)胞凋亡進入不可逆階段[20-21]。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]2型糖尿病合并血管并發(fā)癥患者纖維蛋白原水平的變化及其與血糖波動的相關(guān)性研究[J]. 李云程,應(yīng)長江,李偉.  中國糖尿病雜志. 2018(10)
[2]血糖波動與糖尿病大血管并發(fā)癥的相關(guān)性[J]. 段建芳,王艷妮,金鳳鐘,彭燕,徐先桔,王曉明,蘇慧.  心臟雜志. 2018(02)
[3]抵擋湯早期干預(yù)對2型糖尿病大鼠腫瘤壞死因子-α與血管細(xì)胞黏附分子-1表達的影響[J]. 常柏,李巧芬,常寶成,潘從清,孟東,陳莉明,李春深.  中國中醫(yī)藥信息雜志. 2012(10)
[4]抵擋湯對2型糖尿病患者血管內(nèi)皮功能影響的臨床研究[J]. 常柏,潘從清,孟東,陳莉明,常寶成.  天津中醫(yī)藥. 2011(06)



本文編號：3570218