目的:本課題通過體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)探討新藤黃酸（Gambogenic acid,GNA）對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株（NCI-H446、NCI-H1688）的抗腫瘤作用及其相關(guān)機(jī)制,旨在為后期臨床藥物試驗(yàn)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:體外實(shí)驗(yàn):1.應(yīng)用CCK8法檢測GNA對(duì)小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株（NCI-H446、NCI-H1688）的細(xì)胞增殖的影響。2.應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)法（Flow cytometry）檢測GNA對(duì)兩株細(xì)胞（NCI-H446、NCI-H1688）細(xì)胞凋亡與細(xì)胞周期的影響。3.應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法（Western-Blot）定量檢測GNA處理后兩株細(xì)胞株（NCI-H446、NCI-H1688）內(nèi)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3,8,9、PARP及p53的表達(dá),以期進(jìn)一步探究GNA作用的相關(guān)分子機(jī)制。體內(nèi)實(shí)驗(yàn):1.為進(jìn)一步研究GNA對(duì)小細(xì)胞肺癌（small cell lung cancer,SCLC）的作用,通過建立NCI-H446裸鼠移植瘤模型,應(yīng)用公式法測定不同濃度GNA的抑瘤率、TUNEL法（Terminal-deoxynucleoitidyl Transferase ... 

【文章來源】：東南大學(xué)江蘇省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：48 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

GNA對(duì)NCI-H446、NCI-H1688兩株細(xì)胞增殖的影響：不同濃度（0.6μM-3.2μM）的GNA對(duì)NCI-H446、(a)(b)

Group（μM) UL(%) UR(%) LL(%) LR(%) Apoptosis(%)0 1.70 3.23 92.40 2.62 5.851.4 4.90 20.50 60.20 14.40 34.902 10.50 42.30 18.30 28.90 71.20（a）Group（μM) UL(%) UR(%) LL(%) LR(%) Apoptosis(%)0 0.07 0.12 95.42 4.39 4.512.4 2.40 17.01 64.82 15.77 32.783 0.65 45.53 20.53 33.38 78.91(b)

圖 2.3 GNA 誘導(dǎo) NCI-H446(a)、NCI-H1688(b)兩株細(xì)胞周期阻滯。選用 0μM、0.6μM 和 1.2μM 的 G作用于 NCI-H446，選用 0μM、1.5μM 和 2.2μM 的 GNA 作用于 NCI-H1688，24h 后應(yīng)用 FCM 檢測細(xì)胞期。從上述圖表中我們可以看出，低濃度的 GNA 將 NCI-H446 細(xì)胞阻滯于 G0/G1 期，而高濃度的 GNA將細(xì)胞阻滯于 S 期。而對(duì)于 NCI-H1688，各組細(xì)胞均發(fā)生 S 期周期阻滯。表(a)、(b)分別代表 H446、H1兩株細(xì)胞各周期比率；圖(a)、(b)分別代表 H446、H1688 兩株細(xì)胞各周期比率的柱形圖，應(yīng)用 T 檢驗(yàn)法各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，p<0.05（*）。2.4 GNA 影響 NCI-H446、NCI-H1688 細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)為進(jìn)一步探討 GNA 誘導(dǎo)兩株細(xì)胞凋亡的作用及其可能的分子機(jī)制，采用 Western-B法檢測了凋亡相關(guān)蛋白。根據(jù) CCK8 結(jié)果及預(yù)實(shí)驗(yàn)濃度探究，本實(shí)驗(yàn)選用 1.1μM、1.3μM2.0μM、2.3μM 的 GNA 分別作用于 NCI-H446、NCI-H1688 細(xì)胞 24h 后，測定細(xì)胞內(nèi) BaBcl-2、Cleaved-caspase3,8,9、p53、PARP 的表達(dá)量。結(jié)果顯示：與對(duì)照組相比，兩株細(xì)胞的促凋亡蛋白 Bax、Cleaved-caspase3,8,9、p53、PA

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號(hào)：3560536