樺褐孔菌多糖(IOP)是從傳統(tǒng)中藥樺褐孔菌當(dāng)中提取、分離的多糖類(lèi)成分,具有廣泛的生物活性。本試驗(yàn)室前期研究表明,IOP具有顯著的體內(nèi)抗弓形蟲(chóng)和免疫增強(qiáng)等功能。但對(duì)于IOP的體外抗弓形蟲(chóng)機(jī)制研究尚不明確。因此,本試驗(yàn)將對(duì)IOP對(duì)于弓形蟲(chóng)速殖子體外感染的RAW264.7巨噬細(xì)胞中NF-κB和MAPK兩個(gè)信號(hào)通路調(diào)控機(jī)制做研究。本試驗(yàn)將巨噬細(xì)胞RAW264.7作為試驗(yàn)對(duì)象,研究IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染的RAW264.7巨噬細(xì)胞中炎癥因子表達(dá)水平及基因轉(zhuǎn)錄水平的影響。通過(guò)檢測(cè)NF-κB以及MAPK信號(hào)途徑中關(guān)鍵性蛋白的表達(dá),從分子免疫水平探討IOP的抗弓形蟲(chóng)免疫調(diào)控機(jī)制,為IOP的研發(fā)應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。首先,本試驗(yàn)首先采用MTT法確定IOP的安全試驗(yàn)劑量。試驗(yàn)結(jié)果顯示,0～180μg/mL的IOP無(wú)明顯的細(xì)胞毒性作用(P>0.05)。因此,本試驗(yàn)擬定IOP的高、中、低組中IOP的濃度分別為100μg/mL、50 μg/mL和25 μg/mL。ELISA法檢測(cè)RAW264.7各組細(xì)胞培養(yǎng)液上清中相關(guān)炎癥因子IL-1β、IL-4、IL-6、IFN-γ及TNF-α的表達(dá)調(diào)控水平。RT-PCR方法檢測(cè)...

【文章來(lái)源】： 延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

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【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
    1 弓形蟲(chóng)概述
        1.1 弓形蟲(chóng)生物學(xué)特征
        1.2 弓形蟲(chóng)病的流行特點(diǎn)
        1.3 弓形蟲(chóng)病的癥狀及病理變化
        1.4 弓形蟲(chóng)病的治療現(xiàn)狀
    2 炎性信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        2.1 炎癥概述
        2.2 細(xì)胞因子
        2.3 核因子κB(NF-κB)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
        2.4 MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路
    3 弓形蟲(chóng)感染與相關(guān)信號(hào)通路之間關(guān)系
    4 中藥抗炎免疫調(diào)控
        4.1 免疫概述
        4.2 臨床抗炎免疫藥的分類(lèi)
        4.3 抗炎免疫中藥研究進(jìn)展
    5 樺褐孔菌及樺褐孔菌多糖研究進(jìn)展
        5.1 樺褐孔菌概述
        5.2 樺褐孔菌多糖藥理學(xué)作用
    6 研究目的及意義
材料與方法
    1 材料
        1.1 試驗(yàn)細(xì)胞
        1.2 試驗(yàn)藥物及試劑配制
        1.3 試驗(yàn)主要試劑
        1.4 試驗(yàn)主要儀器設(shè)備
    2 方法
        2.1 試驗(yàn)前細(xì)胞處理
        2.2 藥物處理與試驗(yàn)分組
        2.3 MTT法確定樺褐孔菌多糖的安全劑量
        2.4 ELISA法測(cè)定細(xì)胞因子含量
        2.5 Trizol法提取細(xì)胞總RNA
        2.6 激光共聚焦法測(cè)定通路關(guān)鍵蛋白活性
        2.7 Western Blot法測(cè)定轉(zhuǎn)導(dǎo)通路關(guān)鍵蛋白表達(dá)
        2.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理
結(jié)果
    1 IOP安全劑量確定
    2 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞因子表達(dá)的影響
        2.1 細(xì)胞上清液中IL-1β的表達(dá)
        2.2 細(xì)胞上清液中IL-6的表達(dá)
        2.3 細(xì)胞上清液中TNF-α的表達(dá)
        2.4 細(xì)胞上清液中IFN-γ的表達(dá)
        2.5 細(xì)胞上清液中IL-4的表達(dá)
    3 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞炎性因子及趨化因子mRNA表達(dá)的影響
        3.1 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞IL-1β mRNA表達(dá)的影響
        3.2 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞IL-6 mRNA表達(dá)的影響
        3.3 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞TNF-α mRNA表達(dá)的影響
        3.4 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞MCP-1 mRNA表達(dá)的影響
        3.5 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞MIP-1α mRNA表達(dá)的影響
    4 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞NF-κB通路蛋白表達(dá)的影響
        4.1 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞TLR2蛋白表達(dá)的影響
        4.2 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞TLR4蛋白表達(dá)的影響
        4.3 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞p-IKKα/β、p-IKBα蛋白表達(dá)的影響
        4.4 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞漿蛋白中NF-κB p65蛋白表達(dá)的影響
        4.5 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞核蛋白中NF-κB p65蛋白的表達(dá)影響
        4.6 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染細(xì)胞核蛋白中NF-κB p65活性影響
    5 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞MAPK通路蛋白表達(dá)的影響
        5.1 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染RAW264.7細(xì)胞p-p38、p-JNK與p-ERK蛋白表達(dá)的影響
        5.2 IOP對(duì)弓形蟲(chóng)感染細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子AP-1(c-jun)活性影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡(jiǎn)介
附錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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[3]三葉草肽Ⅲ（TFF3）調(diào)節(jié)腸上皮細(xì)胞核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB及其新的負(fù)反饋調(diào)節(jié)子扭蛋白Twist的機(jī)制：TFF3與腫瘤壞死因子作用的比較[D]. 朱亞勤.中國(guó)醫(yī)科大學(xué). 2006
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[6]CCK-8對(duì)炎癥反應(yīng)中促炎及抗炎性細(xì)胞因子表達(dá)的調(diào)控機(jī)制研究[D]. 倪志宇.河北醫(yī)科大學(xué). 2005
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碩士論文
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[2]ANK1基因在弓形蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育中的作用研究[D]. 刁慧艷.華中農(nóng)業(yè)大學(xué). 2016
[3]黃芪總黃酮對(duì)RAW264.7細(xì)胞NF-κB信號(hào)通路調(diào)控作用的研究[D]. 郭澤.延邊大學(xué). 2016
[4]IL-1β誘導(dǎo)人角膜上皮細(xì)胞產(chǎn)生IL-6和IL-8的分子機(jī)制及地塞米松對(duì)其抑制作用的研究[D]. 周衛(wèi)萍.浙江大學(xué). 2015
[5]弓形蟲(chóng)ROP18激酶抑制宿主NF-κB信號(hào)通路的分子機(jī)制研究[D]. 蔣宗儒.安徽醫(yī)科大學(xué). 2015
[6]樺褐孔菌多糖對(duì)小鼠免疫細(xì)胞的影響[D]. 姜雨薇.延邊大學(xué). 2014
[7]樺褐孔菌多糖對(duì)感染不同毒株弓形蟲(chóng)小白鼠AP-1部分信號(hào)因子的影響研究[D]. 姚琳.延邊大學(xué). 2013
[8]補(bǔ)體C5a在細(xì)菌感染性炎癥中對(duì)IL-8分泌的調(diào)節(jié)研究[D]. 王立燕.中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院. 2010
[9]高血流肺血管重建中內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB的活性研究[D]. 于曉曉.山東大學(xué). 2010
[10]剛地弓形蟲(chóng)RH株速殖子在鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)觀察[D]. 李冬娜.蘇州大學(xué). 2010



本文編號(hào)：3551401