背景:血管緊張素II（Angiotensin II,AngII）誘導的血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscle cell,VSMC）異常增殖、遷移和表型轉化,是高血壓、動脈粥樣硬化等血管重構性疾病發(fā)生發(fā)展的重要病理性基礎。最近有文獻報道,AngII誘導的VSMC增殖和遷移改變與激活NF-κB途徑上調縫隙連接蛋白43（Connexin43,Cx43）表達有關。中藥有效成分吳茱萸次堿（Rutaecarpine,Rut）作為一種降壓藥物被發(fā)現(xiàn)有抑制血管重構效應。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn),Rut可抑制Ox-LDL誘導的VSMC增殖,其機制與激活辣椒素受體（Transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1）抑制Cx43的表達有關。近來,AngII誘導的VSMC衰老在各種血管重構性疾病中的作用也引起廣泛關注,其機制與下調長壽蛋白SIRT1表達有關。我們前期還發(fā)現(xiàn),Rut可抑制高糖誘導的內皮細胞衰老,其機制與激活TRPV1上調SIRT1的表達有關。目的:探究吳茱萸次堿對AngII誘導的VSMC增殖、遷移和表型改變的影響及其機制是否涉及激活T... 

【文章來源】：南昌大學江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與試劑
    2.1 主要的材料與試劑
    2.2 主要儀器和設備
    2.3 主要試劑的配制
第3章 實驗方法
    3.1 原代平滑肌細胞培養(yǎng)
        3.1.1 大鼠原代胸主動脈血管平滑肌細胞獲取及培養(yǎng)：組織塊貼壁法
        3.1.2 細胞復蘇
        3.1.3 細胞傳代
    3.2 實驗分組與處理方法
        3.2.1 實驗分組與內容
        3.2.2 原代細胞的鑒定
        3.2.3 CCK-8檢測細胞活力
        3.2.4 EdU試劑盒檢測VSMC內DNA復制活性
        3.2.5 流式細胞術測定細胞周期變化
        3.2.6 劃痕愈合實驗測定細胞遷移
        3.2.7 Transwell小室(孔徑8μm)遷移實驗
        3.2.8 SA-β-Gal染色
        3.2.9 細胞內活性氧的檢測
        3.2.10 Western blot 檢測平滑肌細胞中 α-SMA、Calponin、Cx43、Cyclin D1SIRT1、P53、P21 及 P-AMPK 蛋白表達水平
        3.2.11 Westernblot結合免疫細胞化學檢測P65核轉位
        3.2.12 數(shù)據(jù)處理
第4章 實驗結果
    第一部分 TRPV1介導Rut抗VSMC增殖、遷移和表型轉化：抑制NF-κB/Cx43途徑
        4.1 培養(yǎng)原代VSMC及鑒定
        4.2 Rut對AngII誘導的VSMC增殖的影響
        4.3 Rut對AngII誘導的VSMC周期分布的影響
        4.4 Rut對AngII誘導的VSMC遷移的影響
        4.5 Rut對AngII誘導的VSMC表型的影響
        4.6 Rut抑制AngII誘導的Cx43表達上調
        4.7 Rut抑制AngII誘導的NF-κBP65轉位
    第二部分 TRPV1介導Rut的抗VSMC衰老：激活AMPK/SIRT1途徑
        4.8 Rut對AngII誘導的VSMC衰老的影響
        4.9 Rut抑制AngII誘導的VSMC衰老的機制：上調SIRT1表達而抑制P53/P21通路
        4.10 Rut通過AMPK通路上調SIRT1表達
第5章 討論
第6章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 下一步研究方向
致謝
參考文獻
攻讀學位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]p38-p53-p21信號通路參與調控血管緊張素-Ⅱ誘導的人血管平滑肌細胞衰老[J]. 廉亞茹,劉新華,韓苗,潘禮龍,胡金鋒,魏剛,倪挺.  復旦學報(自然科學版). 2015(06)
[2]Rutaecarpine Inhibits Angiotensin Ⅱ-Induced Proliferation in Rat Vascular Smooth Muscle Cells[J]. 李艷菊,張鋒,龔其海,吳芹,余麗梅,孫安盛.  Chinese Journal of Integrative Medicine. 2014(09)
[3]Losartan reduced connexin43 expression in left ventricular myocardium of spontaneously hypertensive rats[J]. Li-li ZHAO,Hong-juan CHEN,Jun-zhu CHEN,Min YU,Yun-lan NI,Wei-fang ZHANG(Department of Cardiology,the First Affiliated Hospital,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310003,China).  Journal of Zhejiang University（Science B:An International Biomedicine & Biotechnology Journal）. 2008(06)



本文編號：3503257