目的:采用HepaRG細(xì)胞系及體外肝微粒體體系初步評(píng)價(jià)及推測(cè)大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷（EG）的潛在肝毒性風(fēng)險(xiǎn)。方法:通過三磷酸腺苷（ATP）生物發(fā)光法測(cè)定EG對(duì)HepaRG細(xì)胞的抑制率評(píng)價(jià)EG的整體細(xì)胞毒作用;采用體外肝微粒體孵育法,啟動(dòng)Ⅱ相代謝反應(yīng),考察EG原型對(duì)尿苷二磷酸葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1（UGT1A1）的抑制作用;啟動(dòng)Ⅰ和Ⅱ相代謝反應(yīng),考察EG代謝產(chǎn)物的潛在肝毒性。綜合細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)及UGT1A1酶抑制結(jié)果初步評(píng)價(jià)EG的肝毒性作用。結(jié)果:HepaRG細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,EG具有肝細(xì)胞毒性作用; UGT1A1酶抑制實(shí)驗(yàn)表明,EG原型及其代謝產(chǎn)物均可顯著抑制UGT1A1酶活性,且抑制類型均為競(jìng)爭(zhēng)型抑制,酶活性顯著降低可導(dǎo)致其底物膽紅素體內(nèi)蓄積,繼而存在引發(fā)肝毒性的可能。結(jié)論:大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷及其經(jīng)Ⅱ相代謝酶UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A1產(chǎn)生的Ⅱ相代謝物,可能是產(chǎn)生肝臟毒性的原因,二者可通過抑制UGT1A1酶引發(fā)膽紅素體內(nèi)堆積產(chǎn)生肝毒性。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)新藥雜志. 2020,29(16)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

ATP測(cè)定EG對(duì)HepaRG細(xì)胞的抑制率

由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知(見圖2)，僅啟動(dòng)Ⅱ相代謝反應(yīng)時(shí)，EG以原型形式直接作用于UGT1A1酶，表現(xiàn)為強(qiáng)抑制作用(Ki=3.43μmol·L-1)，抑制類型為競(jìng)爭(zhēng)型抑制;當(dāng)同時(shí)啟動(dòng)Ⅰ，Ⅱ相代謝后，EG對(duì)UGT1A1酶的抑制作用繼續(xù)增強(qiáng)(Ki=0.81μmol·L-1)，抑制類型為競(jìng)爭(zhēng)型抑制。因此我們初步推測(cè)，EG無(wú)論是原型還是其代謝產(chǎn)物均可使UGT1A1酶活性顯著降低，可導(dǎo)致其底物膽紅素體內(nèi)蓄積，繼而存在引發(fā)肝毒性的可能。因此，除原型成分外，明確EG的Ⅰ，Ⅱ相代謝產(chǎn)物可進(jìn)一步闡釋其毒性物質(zhì)基礎(chǔ)。3代謝產(chǎn)物分析

將EG分別啟動(dòng)Ⅰ相代謝，及同時(shí)啟動(dòng)Ⅰ，Ⅱ兩相代謝后對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果見圖3。采用Waters Masslynx 4.1軟件采集代謝產(chǎn)物信息，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入U(xiǎn)NIFI數(shù)據(jù)庫(kù)，與數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)照品信息進(jìn)行比對(duì)分析，同時(shí)采用scientific library功能對(duì)代謝產(chǎn)物進(jìn)行推測(cè)。3.3.1 EGⅠ相代謝成分分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]基于分子對(duì)接及體外抑制實(shí)驗(yàn)預(yù)測(cè)芹菜素潛在藥物相互作用[J]. 汪祺,王亞丹,楊建波,劉越,文海若,馬雙成.  中國(guó)中藥雜志. 2019(18)
[2]基于體外肝代謝考察大黃素甲醚肝毒性作用[J]. 汪祺,王亞丹,楊建波,劉越,文海若,馬雙成.  中國(guó)中藥雜志. 2019(11)
[3]大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷體內(nèi)外抗肝癌活性研究[J]. 李凱明,李勇,李軼群,李登科,孫震曉.  中國(guó)新藥雜志. 2018(10)
[4]大黃蒽醌類成分肝腎毒性和效應(yīng)物質(zhì)研究[J]. 竇志華,許波,施忠,王陳萍,宣東平.  中國(guó)臨床藥理學(xué)雜志. 2018(10)
[5]何首烏中二蒽酮類成分肝毒性研究[J]. 汪祺,戴忠,張玉杰,馬雙成.  藥物分析雜志. 2018(02)
[6]何首烏水提物及其主要成分對(duì)人肝細(xì)胞L02中CYP1A2、CYP2C9和CYP2E1 mRNA表達(dá)的影響[J]. 王子建,李浩,李登科,陳靜,吳雙,周明,全正揚(yáng),孫震曉.  中草藥. 2017(23)
[7]何首烏中大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的分離純化與體外抗癌活性研究[J]. 李登科,李寶賽,崔寶弟,孫震曉.  癌變·畸變·突變. 2014(06)



本文編號(hào)：3502285