目的本研究將闡明自噬和凋亡對氣道上皮細胞的調(diào)控及作用機制,揭示平喘顆粒對氣道上皮細胞自噬和凋亡的干預作用,為中醫(yī)藥治療支氣管哮喘提供科學依據(jù)。方法1.以48只健康清潔級Wistar大鼠（雌雄各半）,隨機分為3組,每組16只,分別是A組（空白對照組）、B組（模型組）、C組（平喘顆粒組）。采用卵蛋白霧化吸入法制備哮喘大鼠模型,HE染色觀察肺組織形態(tài)學改變,免疫組化法檢測肺組織中Beclin-1、LC3B和caspase-3的表達,RT-PCR、Western Blot法檢測肺組織中Beclin-1、LC3B和caspase-3蛋白的含量,觀察平喘顆粒對哮喘持續(xù)期大鼠上皮細胞凋亡和自噬的作用機制。2.以雷帕霉素誘導16HBE細胞為模型,MTT法檢測不同濃度的雷帕霉素和平喘顆粒含藥血清對16HBE細胞的增殖抑制率,并用最佳濃度的雷帕霉素和平喘顆粒含藥血清處理細胞,分為正常對照組、雷帕霉素組、雷帕加氯喹組、雷帕加中藥組。應用透射電鏡觀察各組細胞自噬及凋亡情況,流式細胞技術(shù)檢測細胞凋亡,RT-PCR、Western Blot檢測細胞LC3B、Beclin-1、Caspase-3蛋白的表達,觀察凋亡... 

【文章來源】：黑龍江中醫(yī)藥大學黑龍江省

【文章頁數(shù)】：117 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

圖２細胞自噬過程??２．?４細胞自噬發(fā)生過程的信號通路??

２．?５細胞自噬的作用及意義??從酵母、線蟲、果蠅等低等動物到高等的脊椎動物、哺乳動物，其體??內(nèi)細胞中均存在自噬表現(xiàn)形式。以人體為例，自噬積極參與到了各種ｉＫ常??或異常細胞的生理及病理過程中。生理狀態(tài)下：（１）自噬作為細胞內(nèi)源動??力供應者，其自噬過程可以滿足細胞和機體對代謝底物的需馭，所以／Ｉ：維??持能最代謝方面起了重要作用［７３１。當體內(nèi)處于某種應激狀態(tài)卜（＇，？＂（養(yǎng)曉乏、??缺氧及ｚｋＫＷ子缺乏等），體內(nèi)可以應激性調(diào)整自噬的信號通路，分解更多??蛋白質(zhì)等，用以保證機體細胞ｉＨ常存活需要【６２１。（２）自噬在維持機體細胞??穩(wěn)態(tài)方曲扮演了“管家”角色，ｆｃ耍包括對長壽蛋白降解利用、對缺陷蛋??白和細胞器的消除、對預防異常蛋纟丨質(zhì)聚集體堆積等，其以多種方式參１－Ｊ??細胞質(zhì)的重建與更新，用以維持機體細胞的穩(wěn)定。（３）丨＇丨噬耶細胞死ｒ：通??常被稱為丨Ｉ型程序性細胞死亡，該過程是細胞１復利用「１分�。姿！⒍嘤�??、、

?＿?Ｂ?■??＾?ｖ°?／??圖１－２各組大鼠Ｂｅｃｌｉｎ－１、ＬＣ３Ｂ和ｃａｓｐａｓｅ－３免疫組化結(jié)果??注：★表示與空白對照組比較有顯著Ｘ：異（Ｐ＜〇．０５?），?★★表示與空??白對照組比較有顯著差異（Ｐ＜〇．０１）?，?▲表�。漳Ｐ徒M比較有顯著差異??（ｐ＜ｏ．〇５），?▲▲表示與模型組比較有顯著茇異（ｐ＜ｏ．ｏｎ。??：；ｓ＇，??．?．Ｖ?廣？？：‘??、、Ｖ、：．．：仏乂?Ｗ．．?＊、－ｖＵ，??空甶對照組?稅咁ｍ?肀喘顆粒組??圖１－３各組肺組織ｂｅｅｌｉｎ－ｌ免疫組化??＇＾?；：■－：：．?－ｖ?＇?Ｖｒ，Ｍ??ａ?ｒ?ｉ對照組?模型組?平喘顆粒組??４８??

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3477715