發(fā)布時間：2021-10-17 20:01

　　目的研究黃芪多糖（Astragalus polysaccharide,APS）對人肝癌細(xì)胞增殖的影響,并探討其潛在的藥理作用機(jī)制,為臨床用藥提供依據(jù)。方法采用人肝癌Hep G2細(xì)胞,分別給予0、25、50、100μg·m L-1APS處理,并用10μmol·L-1Akt通路抑制劑LY294002聯(lián)合干預(yù)。噻唑藍(lán)（MTT）法檢測不同濃度APS對Hep G2細(xì)胞增殖活性的影響;免疫印跡法（Western Blot）檢測LC3A、LC3B、P62、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax等蛋白的表達(dá)水平;流式細(xì)胞術(shù)（Flowcy tometry）檢測細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡比例。結(jié)果 APS處理Hep G2后,細(xì)胞形態(tài)變圓變亮; MTT實驗顯示:APS對Hep G2細(xì)胞生長具有抑制作用,且呈劑量依賴性; Western blot檢測細(xì)胞的自噬水平發(fā)現(xiàn):APS可減少LC3A、P62的表達(dá),增加LC3B表達(dá)的水平; APS處理Hep G2細(xì)胞后,呈現(xiàn)G1期細(xì)胞阻滯和細(xì)胞凋亡水平顯著增高,Akt、p-Akt、Bcl-2蛋白表達(dá)的水平降低,Bax蛋白表達(dá)的水平增加;與單獨(dú)處理組比較,APS聯(lián)合LY294... 

【文章來源】：華西藥學(xué)雜志. 2020,35(04)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

0(A)、25(B)、50(C)、100(D)μg·m L-1APS對Hep G2細(xì)胞形態(tài)的影響

采用免疫印跡法(Western Blot)檢測蛋白表達(dá)的水平。將處于對數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞按3×105細(xì)胞接種于6孔板中，分組處理24 h。用NP40裂解細(xì)胞并提取總蛋白和BCA法蛋白;取20μg總蛋白上樣、SDS-PAGE分離、轉(zhuǎn)膜，在一抗(稀釋比例均為1∶1000)中于4℃下孵育過夜，在二抗(1∶5000)室溫下孵育1 h。采用Amersham Imager 600 System(GE)觀察蛋白印跡條帶和成像;應(yīng)用Image J軟件半定量分析蛋白印跡條帶的積分光密度。結(jié)果以GAPDH為內(nèi)參，計算各目的蛋白的比值，半定量表示蛋白的相對表達(dá)水平。與對照組比較，APS各處理組HepG2細(xì)胞中LC3B的表達(dá)呈濃度依賴性增高(P<0.05);相反，APS可減少LC3A、P62的表達(dá)(P<0.05)。提示APS引起的細(xì)胞周期阻滯和線粒體依賴性凋亡與細(xì)胞自噬相關(guān)(圖3)。圖3 APS對Hep G2細(xì)胞LC3A、LC3B和P62蛋白表達(dá)的影響(A．電泳圖;B．柱狀圖)

APS對Hep G2細(xì)胞LC3A、LC3B和P62蛋白表達(dá)的影響(A．電泳圖;B．柱狀圖)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黃芪多糖對慢性疲勞小鼠骨骼肌線粒體功能的影響及作用機(jī)制[J]. 黃燕峰,朱達(dá)堅,魯路.  廣東醫(yī)學(xué). 2017(12)
[2]黃芪多糖對小鼠免疫功能影響的研究[J]. 石永芳.  山東化工. 2017(03)
[3]川陳皮素對肝癌細(xì)胞的抑制作用[J]. 趙妍妍,馬秀英,周黎明.  華西藥學(xué)雜志. 2007(02)
[4]苦馬豆素對肝癌細(xì)胞在體內(nèi)外生長的抑制作用[J]. 孫紀(jì)元,朱妙章,王四旺,謝艷華,王劍波,繆珊.  華西藥學(xué)雜志. 2006(03)



本文編號：3442338