目的:研究丹參多糖（Salvia miltiorrhiza polysaccharide,SMP）和丹參素鈉（sodium Danshensu,SDSS）對(duì)人外周血T淋巴細(xì)胞增殖和殺傷活性的影響及其作用機(jī)制。方法:采用水提醇沉法提取SMP并純度鑒定;Ficoll密度梯度離心法分離人外周血淋巴細(xì)胞,細(xì)胞分為兩部分,一部分淋巴細(xì)胞加藥處理,流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度SMP和SDSS對(duì)淋巴細(xì)胞表型（CD3+、CD14+、CD19+、CD56+）的影響;倒置熒光顯微鏡、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和CFSE染色考察不同濃度SMP和SDSS對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的影響;鈣黃綠素法檢測(cè)其對(duì)淋巴細(xì)胞殺傷能力的影響;一部分細(xì)胞按照CIK培養(yǎng),加入細(xì)胞因子刺激活化,按照上述步驟檢測(cè)兩種藥物對(duì)CIK細(xì)胞增殖的影響。提取細(xì)胞樣品總RNA和蛋白,用RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞增殖相關(guān)基因IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ和TLR家族mRNA基因表達(dá)變化。用Western Blotting檢測(cè)MAPK信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路相關(guān)蛋白ERK、JNK、IκBα、p-p65等蛋白的變化。為驗(yàn)證SMP和SDSS刺激T淋巴細(xì)胞增殖活化是否是通過(guò)MA... 

【文章來(lái)源】：廣東藥科大學(xué)廣東省

【文章頁(yè)數(shù)】：76 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 序言
    1.1 研究背景
    1.2 研究目的、意義
    1.3 研究?jī)?nèi)容
    1.4 研究路線
第二章 SMP和SDSS促進(jìn)人外周血淋巴細(xì)胞增殖藥效學(xué)研究
    2.1 前言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 樣本
        2.2.2 試劑
        2.2.3 儀器
        2.2.4 主要溶液的配置
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 丹參多糖的提取與純度鑒定
        2.3.2 人外周血淋巴細(xì)胞的分離與培養(yǎng)
        2.3.3 免疫熒光標(biāo)記檢測(cè)丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞表型的影響
        2.3.4 細(xì)胞計(jì)數(shù)儀檢測(cè)丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞數(shù)量的影響
        2.3.5 CFSE染色檢測(cè)丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞增殖能力的影響
        2.3.6 鈣黃綠素-AM(Calcein-AM)熒光檢測(cè)丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞殺傷活性的影響
        2.3.7 丹參多糖和丹參素鈉對(duì)T淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子基因表達(dá)水平的影響
        2.3.8 統(tǒng)計(jì)分析
    2.4 結(jié)果
        2.4.1 丹參多糖純度測(cè)定
        2.4.2 丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞表型的影響
        2.4.3 丹參多糖和丹參素鈉對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖的影響
        2.4.4 丹參多糖和丹參素鈉對(duì)淋巴細(xì)胞殺傷活性的影響
        2.4.5 丹參多糖和丹參素鈉對(duì)T淋巴細(xì)胞細(xì)胞因子分泌的影響
    2.5 小結(jié)
第三章 SMP和SDSS對(duì)T淋巴細(xì)胞增殖機(jī)制研究
    3.1 前言
    3.2 材料
        3.2.1 試劑
        3.2.2 儀器
        3.2.3 主要溶液的配制
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 RT-PCR檢測(cè)TLR家族相關(guān)基因的表達(dá)
        3.3.2 Western blotting檢測(cè)T細(xì)胞活化信號(hào)通路蛋白表達(dá)的影響
    3.4 結(jié)果
        3.4.1 丹參多糖對(duì)T淋巴細(xì)胞TLR基因表達(dá)的影響
        3.4.2 丹參素鈉對(duì)T淋巴細(xì)胞TLR基因表達(dá)的影響
        3.4.3 丹參多糖對(duì)T細(xì)胞活化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
        3.4.4 丹參素鈉對(duì)T細(xì)胞活化相關(guān)蛋白表達(dá)的影響
    3.5 小結(jié)
討論
參考文獻(xiàn)
附錄一 英文縮略詞表
附錄二 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3435327