發(fā)布時間：2021-10-11 11:55

　　背景:人參炔三醇（Panaxytriol,PXT）是高麗參、紅參提取物及參麥注射液中的重要活性成分之一,它能夠抑制許多腫瘤細胞的活性,有助于緩解某些癌癥療法的不良反應(yīng),因而PXT在抗腫瘤方面有著較好的應(yīng)用前景。課題組前期研究表明,PXT能下調(diào)大鼠原代肝細胞中CYP3A1/2 mRNA的表達。那么在人源性的HepG2細胞中,PXT如何來調(diào)控CYP3A4的表達,值得深入探討。目的:研究PXT長短時干預(yù)對正常HepG2細胞和高表達hPXR的HepG2細胞中PXR、CYP3A4 mRNA和蛋白表達的影響及對PXR-CYP3A4調(diào)控通路的影響機制,為進一步深入探索PXT與臨床藥物可能的相互作用提供實驗與理論基礎(chǔ)。方法:1.構(gòu)建正常HepG2和高表達hPXR的HepG2細胞模型,描繪HepG2細胞的生長曲線;使用MTS法考察系列濃度的PXT對HepG2細胞的毒性作用。2.使用Q-PCR、Western blot等技術(shù)手段,考察PXT長短時干預(yù)對正常HepG2細胞和高表達hPXR的HepG2細胞中PXR、CYP3A4 mRNA和蛋白表達的影響。3.通過構(gòu)建質(zhì)粒、瞬時共轉(zhuǎn)染及雙熒光素酶報告基因法,考察... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
中英文縮略詞表
第1章 引言
第2章 PXT對HEPG2細胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表達的影響
    2.1 材料
        2.1.1 細胞株
        2.1.2 主要藥品
        2.1.3 主要試劑
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 方法
        2.2.1 主要溶液的配制
        2.2.2 HepG2細胞的培養(yǎng)
        2.2.3 HepG2細胞生長曲線的測定
        2.2.4 PXT對HepG2細胞的體外細胞毒性實驗
        2.2.5 PXT對正常HepG2細胞中PXR和CYP3A4 mRNA表達的影響
        2.2.6 PXT對正常HepG2細胞中PXR和CYP3A4蛋白表達的影響
        2.2.7 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    2.3 結(jié)果
        2.3.1 HepG2細胞形態(tài)學(xué)及生長曲線
        2.3.2 PXT對HepG2細胞的體外細胞毒性
        2.3.3 PXT對正常HepG2細胞中PXR和CYP3A4 mRNA表達的影響
        2.3.4 PXT對正常HepG2細胞中PXR和CYP3A4蛋白表達的影響
    2.4 討論
第3章 PXT對高表達HPXR的HEPG2細胞中PXR和CYP3A4 MRNA和蛋白表達的影響
    3.1 材料
        3.1.1 細胞株及質(zhì)粒
        3.1.2 主要藥品
        3.1.3 主要試劑
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 方法
        3.2.1 主要溶液的配置
        3.2.2 HepG2細胞的培養(yǎng)
        3.2.3 構(gòu)建高表hPXR的HepG2細胞模型
        3.2.4 PXT對高表達hPXR的HepG2細胞中PXR和CYP3A4 mRNA表達的影響
        3.2.5 PXT對hPXR的HepG2細胞中PXR和CYP3A4蛋白表達的影響
        3.2.6 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    3.3 結(jié)果
        3.3.1 構(gòu)建高表達hPXR的HepG2細胞模型的鑒定
        3.3.2 PXT對高表達hPXR的HepG2細胞中PXR和CYP3A4 mRNA表達的影響
        3.3.3 PXT高表達干預(yù)對高表達hPXR的HepG2細胞中PXR和CYP3A4蛋白表達的影響
    3.4 討論
第4章 PXT對瞬時共轉(zhuǎn)染HPXR的HEPG2細胞中CYP3A4報告基因的影響
    4.1 材料
        4.1.1 細胞株及質(zhì)粒
        4.1.2 主要藥品
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 主要儀器設(shè)備
    4.2 方法
        4.2.1 主要溶液的配制
        4.2.2 HepG2細胞培養(yǎng)
        4.2.3 質(zhì)粒構(gòu)建、擴增、提取及鑒定
        4.2.4 細胞瞬時轉(zhuǎn)染
        4.2.5 雙熒光素酶活性測定
        4.2.6 基于hPXR雙熒光素酶報告基因模型的瞬時轉(zhuǎn)染條件探索
        4.2.7 基于hPXR雙熒光素酶報告基因模型的鑒定
        4.2.8 PXT對瞬時共轉(zhuǎn)染hPXR的hepG2細胞中CYP3A4報告基因的影響
        4.2.9 PXT和RIF共同干預(yù)對瞬時共轉(zhuǎn)染hPXR的hepG2細胞中CYP3A4報告基因的影響
        4.2.10 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計分析
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 質(zhì)粒鑒定
        4.3.2 瞬時共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒條件摸索
        4.3.3 基于hPXR雙熒光素酶報告基因模型的驗證
        4.3.4 PXT對瞬時共轉(zhuǎn)染hPXR的hepG2細胞中CYP3A4報告基因的影響
        4.3.5 PXT與RIF共同干預(yù)對瞬時共轉(zhuǎn)染hPXR的hepG2細胞中CYP3A4報告基因的影響
    4.4 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
[1]銀杏內(nèi)酯B通過激活孕烷X受體誘導(dǎo)CYP3A4的表達[J]. 周濤,王宇光,馬增春,肖勇,湯響林,梁乾德,胡東華,肖成榮,譚洪玲,高月.  中國藥理學(xué)通報. 2014(07)
[2]孕烷X受體（PXR）對藥物代謝途徑的調(diào)控[J]. 葛樂樂,范輝,馬珂.  中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué). 2013(12)
[3]吳茱萸堿與吳茱萸次堿經(jīng)PXR、CAR核受體通路影響CYP3A4表達的研究[J]. 黃凌,鄺少軼,張麗.  中國藥房. 2013(35)
[4]核受體對藥物代謝酶和轉(zhuǎn)運體的調(diào)控[J]. 劉志浩,李燕.  藥學(xué)學(xué)報. 2012(12)
[5]核受體對細胞色素P450的調(diào)控作用研究進展[J]. 何芳,曾彩雯,夏春華,熊玉卿.  中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué). 2012(10)
[6]人源性抗體在HEK293T細胞中瞬時表達條件的優(yōu)化[J]. 陶俊,向軍儉,王宏,龔義平,鄧寧.  生物技術(shù)通報. 2010(11)
[7]孕烷X受體對細胞色素P450 3A調(diào)控機制的研究進展[J]. 李越,李燕.  國際藥學(xué)研究雜志. 2009(03)
[8]孕烷X受體的研究進展及其在藥物代謝中的作用[J]. 劉彥鋒,李紅星,頡欣妮,王芳,翟永功.  中國新藥雜志. 2008(14)
[9]孕烷X受體及組成型雄烷受體在藥物代謝和研發(fā)中的應(yīng)用[J]. 張江虹,金一尊.  國外醫(yī)學(xué).藥學(xué)分冊. 2006(01)
[10]Purification of full-length human Pregnane and Xenobiotic Receptor:polyclonal antibody preparation for immunological characterization[J]. Mallampati SARADHI,Biji KRISHNA,Gauranga MUKHOPADHYAY,Rakesh K TYAGI.  Cell Research. 2005(10)



本文編號：3430461