目的:探究半枝蓮醇提物對結(jié)直腸干細胞自我更新和分化的影響并闡明其分子作用機制。方法:慢病毒轉(zhuǎn)染結(jié)腸腫瘤HT-29細胞,磁珠抗體標記法分選結(jié)腸干細胞;用CCK-8法檢測半枝蓮對腫瘤干細胞的活性;3D培養(yǎng)法、干細胞成球?qū)嶒灐傊羌鋵嶒炋骄堪胫ι弻T-29^Smo-CSC的生長更新及其轉(zhuǎn)化的影響。實時熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測半枝蓮對非經(jīng)典Hedgehog信號通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其標記基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影響。結(jié)果:半枝蓮能抑制HT-29^Smo-CSC活性、生長轉(zhuǎn)化及成球能力,顯著下調(diào)Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表達,上調(diào)Sufu,下調(diào)Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表達。結(jié)論:半枝蓮醇提物能抑制HT-29^Smo-CSC的增殖和分化,對非經(jīng)典Hedgehog信號通路關(guān)鍵靶基因和蛋白有顯著抑制作用,提示半枝蓮能通過非經(jīng)典Hedgehog信號通路抑制結(jié)直... 

【文章來源】：中藥材. 2020,43(03)北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

HT-29Smo-CSC細胞的建立

結(jié)果如圖5所示,與溶劑對照組比較,半枝蓮1 000、500 μg/mL組HT-29Smo-CSC細胞分化狀態(tài)差,高濃度幾乎不分化,而半枝蓮250 μg/mL組及GANT-61組細胞分化狀態(tài)較好,細胞活力較好,分化明顯。表2 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細胞成球能力的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度 球形成率/% 溶劑對照組 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝蓮組 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61組 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:與溶劑對照組比較,*P<0.05,**P<0.01

腫瘤干細胞是一群具有自我更新和分化能力的腫瘤細胞,自從1994年從人急性髓性白血病研究中被證實以來[9],越來越多的腫瘤干細胞在實體瘤中如腦癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等被發(fā)現(xiàn)[10]。研究認為結(jié)直腸腫瘤干細胞是導(dǎo)致結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要因素,因此研究結(jié)直腸腫瘤干細胞特異性標記物,探索其作用機制,是靶向治療結(jié)直腸癌的關(guān)鍵�？勺鳛榻Y(jié)腸腫瘤干細胞特異性標記物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次實驗采用免疫磁珠分選法,所獲得的目的細胞純度較高以及對細胞損傷較小,從流式檢測結(jié)果看來,經(jīng)磁珠分選的HT-29Smo-細胞陽性表達率高達93.56%,表明所獲得的干細胞純度較高。圖4 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細胞生長轉(zhuǎn)化的影響(×200)

【參考文獻】：
期刊論文
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[5]半枝蓮抗腫瘤作用及機制研究進展[J]. 滿其倩,左琳,呂青濤.  遼寧中醫(yī)雜志. 2015(11)
[6]半枝蓮?fù)ㄟ^Hedgehog信號通路抑制結(jié)腸腫瘤干細胞自我更新[J]. 盧小路,徐海波,石夢瑩,史玉榮,周麗娟,王德健,陳繼蘭,方皓,譚溧,周雪.  中藥藥理與臨床. 2015(01)



本文編號：3343020