半枝蓮?fù)ㄟ^Hedgehog非經(jīng)典信號通路抑制結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞自我更新和分化
發(fā)布時間：2021-08-14 19:09
目的:探究半枝蓮醇提物對結(jié)直腸干細(xì)胞自我更新和分化的影響并闡明其分子作用機(jī)制。方法:慢病毒轉(zhuǎn)染結(jié)腸腫瘤HT-29細(xì)胞,磁珠抗體標(biāo)記法分選結(jié)腸干細(xì)胞;用CCK-8法檢測半枝蓮對腫瘤干細(xì)胞的活性;3D培養(yǎng)法、干細(xì)胞成球?qū)嶒�、瓊脂糖集落實驗探究半枝蓮對HT-29Smo-CSC的生長更新及其轉(zhuǎn)化的影響。實時熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測半枝蓮對非經(jīng)典Hedgehog信號通路基因和蛋白Shh、Ptch1、Gli1、Sufu及其標(biāo)記基因CD133、靶基因c-Myc、分化基因CK20、增殖基因Ki67、更新基因Nanog的影響。結(jié)果:半枝蓮能抑制HT-29Smo-CSC活性、生長轉(zhuǎn)化及成球能力,顯著下調(diào)Gli1、c-Myc、Shh mRNA及蛋白的表達(dá),上調(diào)Sufu,下調(diào)Ptch1、CD133、CK20、Ki67、Nanog mRNA表達(dá)。結(jié)論:半枝蓮醇提物能抑制HT-29Smo-CSC的增殖和分化,對非經(jīng)典Hedgehog信號通路關(guān)鍵靶基因和蛋白有顯著抑制作用,提示半枝蓮能通過非經(jīng)典Hedgehog信號通路抑制結(jié)直...
【文章來源】：中藥材. 2020,43(03)北大核心
【文章頁數(shù)】：7 頁
【部分圖文】：
HT-29Smo-CSC細(xì)胞的建立
結(jié)果如圖5所示,與溶劑對照組比較,半枝蓮1 000、500 μg/mL組HT-29Smo-CSC細(xì)胞分化狀態(tài)差,高濃度幾乎不分化,而半枝蓮250 μg/mL組及GANT-61組細(xì)胞分化狀態(tài)較好,細(xì)胞活力較好,分化明顯。表2 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細(xì)胞成球能力的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度 球形成率/% 溶劑對照組 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝蓮組 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61組 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:與溶劑對照組比較,*P<0.05,**P<0.01
腫瘤干細(xì)胞是一群具有自我更新和分化能力的腫瘤細(xì)胞,自從1994年從人急性髓性白血病研究中被證實以來[9],越來越多的腫瘤干細(xì)胞在實體瘤中如腦癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等被發(fā)現(xiàn)[10]。研究認(rèn)為結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞是導(dǎo)致結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要因素,因此研究結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物,探索其作用機(jī)制,是靶向治療結(jié)直腸癌的關(guān)鍵。可作為結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次實驗采用免疫磁珠分選法,所獲得的目的細(xì)胞純度較高以及對細(xì)胞損傷較小,從流式檢測結(jié)果看來,經(jīng)磁珠分選的HT-29Smo-細(xì)胞陽性表達(dá)率高達(dá)93.56%,表明所獲得的干細(xì)胞純度較高。圖4 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細(xì)胞生長轉(zhuǎn)化的影響(×200)
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)直腸癌中Hedgehog信號通路的研究進(jìn)展[J]. 王華,李奇奇,朱子清,楊進(jìn),陳爾飛. 生命的化學(xué). 2018(05)
[2]中藥半枝蓮有效成分抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 吳曉龍,崔思遠(yuǎn),王琰,徐瑞榮. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(04)
[3]基于Hedgehog信號通路的野黃芩苷抑制HT-29細(xì)胞源性結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞體外自我更新的研究[J]. 熊思會,萬莎,譚溧,雷楠,盧小路,沈小鋼,周麗娟,徐海波. 中藥藥理與臨床. 2017(05)
[4]結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞相關(guān)因子研究進(jìn)展[J]. 曲澤,侯明星,王峰. 中國腫瘤臨床與康復(fù). 2017(03)
[5]半枝蓮抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 滿其倩,左琳,呂青濤. 遼寧中醫(yī)雜志. 2015(11)
[6]半枝蓮?fù)ㄟ^Hedgehog信號通路抑制結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞自我更新[J]. 盧小路,徐海波,石夢瑩,史玉榮,周麗娟,王德健,陳繼蘭,方皓,譚溧,周雪. 中藥藥理與臨床. 2015(01)
本文編號：3343020
【文章來源】：中藥材. 2020,43(03)北大核心
【文章頁數(shù)】：7 頁
【部分圖文】：
HT-29Smo-CSC細(xì)胞的建立
結(jié)果如圖5所示,與溶劑對照組比較,半枝蓮1 000、500 μg/mL組HT-29Smo-CSC細(xì)胞分化狀態(tài)差,高濃度幾乎不分化,而半枝蓮250 μg/mL組及GANT-61組細(xì)胞分化狀態(tài)較好,細(xì)胞活力較好,分化明顯。表2 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細(xì)胞成球能力的影響 ( x ˉ ±s,n=3) 組別 濃度 球形成率/% 溶劑對照組 0.1% DMSO 19.43±1.55 半枝蓮組 250 μg/mL 13.37±2.02* 500 μg/mL 8.77±0.96** 1 000 μg/mL 3.77±0.64** GANT-61組 20 μmol/L 7.20±0.76** 注:與溶劑對照組比較,*P<0.05,**P<0.01
腫瘤干細(xì)胞是一群具有自我更新和分化能力的腫瘤細(xì)胞,自從1994年從人急性髓性白血病研究中被證實以來[9],越來越多的腫瘤干細(xì)胞在實體瘤中如腦癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌等被發(fā)現(xiàn)[10]。研究認(rèn)為結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞是導(dǎo)致結(jié)直腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要因素,因此研究結(jié)直腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物,探索其作用機(jī)制,是靶向治療結(jié)直腸癌的關(guān)鍵。可作為結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞特異性標(biāo)記物的有CD133、CD44、CD66、ALDH1、Lgr5等[11]。本次實驗采用免疫磁珠分選法,所獲得的目的細(xì)胞純度較高以及對細(xì)胞損傷較小,從流式檢測結(jié)果看來,經(jīng)磁珠分選的HT-29Smo-細(xì)胞陽性表達(dá)率高達(dá)93.56%,表明所獲得的干細(xì)胞純度較高。圖4 半枝蓮對HT-29Smo-CSC細(xì)胞生長轉(zhuǎn)化的影響(×200)
【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]結(jié)直腸癌中Hedgehog信號通路的研究進(jìn)展[J]. 王華,李奇奇,朱子清,楊進(jìn),陳爾飛. 生命的化學(xué). 2018(05)
[2]中藥半枝蓮有效成分抗腫瘤作用機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 吳曉龍,崔思遠(yuǎn),王琰,徐瑞榮. 中華中醫(yī)藥雜志. 2018(04)
[3]基于Hedgehog信號通路的野黃芩苷抑制HT-29細(xì)胞源性結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞體外自我更新的研究[J]. 熊思會,萬莎,譚溧,雷楠,盧小路,沈小鋼,周麗娟,徐海波. 中藥藥理與臨床. 2017(05)
[4]結(jié)腸癌腫瘤干細(xì)胞相關(guān)因子研究進(jìn)展[J]. 曲澤,侯明星,王峰. 中國腫瘤臨床與康復(fù). 2017(03)
[5]半枝蓮抗腫瘤作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 滿其倩,左琳,呂青濤. 遼寧中醫(yī)雜志. 2015(11)
[6]半枝蓮?fù)ㄟ^Hedgehog信號通路抑制結(jié)腸腫瘤干細(xì)胞自我更新[J]. 盧小路,徐海波,石夢瑩,史玉榮,周麗娟,王德健,陳繼蘭,方皓,譚溧,周雪. 中藥藥理與臨床. 2015(01)
本文編號：3343020
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