目的開發(fā)卷丹Lilium lancifolium、蘭州百合L. davidii var. willmottia、岷江百合L. regale、香水百合L. casa和龍牙百合L. brownie var. viridulum的EST-SSR分子鑒別體系,分析EST-SSR分子標(biāo)記技術(shù)對百合近緣種的開發(fā)效率和鑒別能力。方法利用MISA.pl程序?qū)CBI公布的百合屬EST基因序列進(jìn)行SSR位點的識別,通過Primer3程序模塊批量生成EST-SSR引物,經(jīng)PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳對引物進(jìn)行初篩,用聚丙烯酰胺凝膠電泳驗證初篩引物,標(biāo)記并分析不同種質(zhì)的特征泳帶,構(gòu)建鑒別體系。結(jié)果共設(shè)計了199對SSR引物,經(jīng)過26對引物的篩選,獲得了2對高效鑒別引物,其中引物JZ391構(gòu)建的分子鑒別體系,可有效鑒別混摻的商品百合,具有一定的實用價值。結(jié)論基于研究材料具有極端的遺傳特征,本實驗鑒定標(biāo)記開發(fā)非常高效,研究結(jié)果證實了物種的遺傳基礎(chǔ)是影響其EST-SSR分子標(biāo)記開發(fā)效率的重要因素,同時,該案例可為其他類似百合遺傳基礎(chǔ)的中藥材進(jìn)行EST-SSR標(biāo)記開發(fā),提供參考尺度。 

【文章來源】：中草藥. 2020,51(16)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

不同百合產(chǎn)品進(jìn)行分子標(biāo)記試驗的可靠性驗證

對NCBI公布的百合屬EST序列進(jìn)行SSR引物設(shè)計，獲得199對設(shè)計引物，利用瓊脂糖電泳篩選26對SSR引物。26對SSR引物對參試的對照樣本可進(jìn)行有效的PCR擴(kuò)增（圖2），該結(jié)果表明，利用Perl計算機(jī)語言批量設(shè)計EST-SSR引物的方法有效，可以作為SSR引物設(shè)計的方法之一。其次，通過對電泳圖譜的進(jìn)一步分析，26對SSR引物的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物有5種結(jié)果：（1）對照間具有“梯度PCR”的特征，對照間帶型差異較�。▓D2-A);(2）對照間具有“梯度PCR”的特征，對照間帶型一致（圖2-B);(3）參試樣本之一沒有PCR擴(kuò)增產(chǎn)物（圖2-D);(4）參試樣本之一沒有表現(xiàn)“梯度PCR”的特征（圖2-E);(5）對照間具有“梯度PCR”的特征，對照間帶型具有顯著差異（圖2-C），擴(kuò)增出5種帶型圖譜所用SSR引物的比例依次為8∶14∶1∶1∶2，基于本實驗以篩選高效鑒定引物為目的，舍棄圖2-A、圖2-B、圖2-D和圖2-E帶型對應(yīng)的SSR引物，以擴(kuò)增出圖2-C泳帶特征的引物作為初篩鑒定引物。3.3 初篩鑒定引物的驗證篩選與百合EST-SSR分子鑒定體系的構(gòu)建

百合EST-SSR分子鑒定體系構(gòu)建如下：引物JZ391（正向：TAAGTATGTCCAGCC CGGAG，反向：GTGGGTCCCTTCAGGGTTT);Tm值57.5℃；基準(zhǔn)鑒別位點為蘭州百合98 bp，卷丹360 bp，岷江百合270、185 bp，龍牙百合505、325 bp（圖3）。3.4 百合EST-SSR分子鑒別體系對商品百合的檢測結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]輪葉黨參EST-SSR標(biāo)記的開發(fā)及在黨參屬中的應(yīng)用[J]. 劉新星,石有太,羅俊杰,歐巧明,陳子萱,李忠旺.  中草藥. 2018(13)
[2]線粒體DNA標(biāo)記在動物類藥材分子鑒定中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 陳夢,方昀,程汝濱,黃真,張光霽,陳建真.  中草藥. 2018(13)
[3]廣西莪術(shù)EST-SSR標(biāo)記開發(fā)及其在遺傳多樣性分析中的應(yīng)用[J]. 楊妮,郭嗣斌,王建,劉平武,李孝瓊,謝巍,蘇偉敏,靳雅慧.  藥物分析雜志. 2017(12)
[4]分子標(biāo)記技術(shù)在獐牙菜屬植物研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 楊春芳,曾陽,郭鳳霞,王文穎,李錦萍,劉力寬.  中草藥. 2017(15)
[5]遼寧地區(qū)綠豆品種SSR指紋圖譜構(gòu)建及品種鑒定[J]. 趙雅楠,王穎,張東杰.  食品科學(xué). 2018(06)
[6]分子鑒定技術(shù)在中藥中的應(yīng)用[J]. 時圣明,潘明佳,王潔,陳常青.  中草藥. 2016(17)
[7]黃芪與紅芪SSR引物的篩選及鑒定指紋代碼的構(gòu)建[J]. 厚毅清,石有太,張艷萍,劉新星,陳玉粱.  中國中藥雜志. 2016(10)
[8]DNA分子標(biāo)記檢測方法及在茶樹中的研究進(jìn)展[J]. 劉振,趙洋,楊培迪,成楊,寧靜,楊陽.  茶葉學(xué)報. 2015(02)
[9]粉末中藥鑒別方法的研究進(jìn)展與思考實踐[J]. 吳娜,楊詩龍,嚴(yán)丹,彭偉,胥敏,張超,李欣逸,劉玉杰,吳純潔.  中草藥. 2015(10)
[10]露地栽培條件下百合的生長規(guī)律及種球繁殖技術(shù)[J]. 王瑩,王良桂,黃成名,李玉帆,袁素霞,劉春,明軍.  中國農(nóng)業(yè)科學(xué). 2014(08)

碩士論文
[1]十五種百合在豫北地區(qū)引種調(diào)查試驗[D]. 韓冰.河北工程大學(xué) 2018
[2]百合主要病毒的分子檢測及脫毒技術(shù)研究[D]. 徐榕雪.南京林業(yè)大學(xué) 2007
[3]蘭州百合化學(xué)成分的研究[D]. 王琦.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2007



本文編號：3283812