目的:觀察溫陽(yáng)活血利水方含藥血清對(duì)嘌呤霉素?fù)p傷小鼠永生系足細(xì)胞組織蛋白酶L（Cathepsin L,Cat L）的轉(zhuǎn)錄因子Dendrin、膜相關(guān)鳥(niǎo)苷酸激酶轉(zhuǎn)化蛋白2（Membrane-associated guanylate kinase inverted2,MAGI-2）、下游底物synaptopodin、RhoA的表達(dá)變化以及足細(xì)胞骨架蛋白actin、中間絲分布情況的影響,探討溫陽(yáng)活血利水方的作用改善腎病綜合征蛋白尿及足突融合的機(jī)制。方法:體外培養(yǎng)小鼠永生系足細(xì)胞MPC5,采用嘌呤霉素45mg/L損傷足細(xì)胞12h后分組,并設(shè)正常對(duì)照、中藥血清空白對(duì)照,具體分組如下:A.正常對(duì)照組、B.模型組、C.中藥血清空白對(duì)照組、D.地塞米松（1umol/l）組、E.10%中藥血清組、F.20%中藥血清組,孵育12小時(shí),熒光定量PCR檢測(cè)Synaptopodin、Cat L m RNA表達(dá)變化;western blotting測(cè)定MAGI-2、Synaptopodin、Cat L、RhoA的蛋白表達(dá);細(xì)胞免疫熒光觀察Dendrin、MAGI-2、Synaptopodin、Cat L、RhoA的表... 

【文章來(lái)源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞中微絲、中間絲、微管之間連接在本實(shí)驗(yàn)熒光染色結(jié)果顯示嘌呤霉素?fù)p傷足細(xì)胞后足細(xì)胞數(shù)目減少，偽足縮短甚至消失，細(xì)胞骨架微絲、中間絲結(jié)構(gòu)紊亂，雜亂無(wú)序排列，地

圖 2 正常足細(xì)胞足突與疾病狀態(tài)下足細(xì)胞足突融合3.Dendrin（樹(shù)突蛋白）及其下游相關(guān)蛋白在腎小球性蛋白尿發(fā)病機(jī)制中的作用控制和穩(wěn)定 actin 骨架蛋白的分子理所當(dāng)然對(duì)維持腎小球?yàn)V過(guò)功能非常重要。在過(guò)去 10 年中，很多足細(xì)胞 actin 相關(guān)的蛋白被發(fā)現(xiàn)，證實(shí)了動(dòng)態(tài) actin 骨架蛋白重組在維持完整濾過(guò)屏障關(guān)聯(lián)性。MAGI-2（膜相關(guān)鳥(niǎo)苷酸激酶轉(zhuǎn)化蛋白 2）是足細(xì)胞 actin 相關(guān)蛋白中的一種，同時(shí)是 SD 復(fù)合蛋白的復(fù)雜組成部分之一，屬于 MAGUK（膜相關(guān)鳥(niǎo)苷酸激酶）家族，是上皮組織中緊密連接的含有多個(gè)結(jié)構(gòu)域的支架蛋白[18]。MAGI-2 在大腦中高度表達(dá)，其次表達(dá)于睪丸和腎臟，在腎臟組織中僅表達(dá)于足細(xì)胞，定位于足突[18,19]。MAGI-2 能將細(xì)胞粘附分子、受體、和信號(hào)分子與細(xì)胞骨架相連來(lái)維持細(xì)胞間的結(jié)構(gòu)。MAGI-2 在維持腎小球?yàn)V

Synaptopodin 基因的沉默引起 RhoA 蛋白表達(dá)的降低[31]，抑制足細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的重排和應(yīng)力纖維的形成。在我們實(shí)驗(yàn)中，嘌呤霉素?fù)p傷足細(xì)胞后，synaptopodin 水平明顯下降，與此同時(shí)，RhoA 蛋白表達(dá)也降低，但是 synaptopodin mRNA 沒(méi)有明顯變化，提示這可能與 MAGI-2 下降后，Dendrin 核轉(zhuǎn)位，引起下游蛋白CatLmRNA 增加,CatL 水平增高，加強(qiáng)了 synaptopodin 酶解，從而因此足細(xì)胞 actin 與中間絲改變，足細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變。而溫陽(yáng)活血利水方能升高 MAGI-2 水平，抑制 Dendrin 核轉(zhuǎn)位和 CatLmRNA 轉(zhuǎn)錄，降低 CatL 表達(dá)減少 synaptopodin 降解，RhoA 蛋白表達(dá)升高，從而改善足細(xì)胞形態(tài)。與我們實(shí)驗(yàn)結(jié)果類似，Ransom 等同樣在嘌呤霉素?fù)p傷小鼠足細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，RhoA 活性水平下降，而糖皮質(zhì)激素能升高 RhoA 活性，改善足細(xì)胞骨架蛋白穩(wěn)定性[38]。


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