藥典記載,鹿茸具有壯腎陽、益精血等功效。順鉑是常見的抗腫瘤化療藥,但因其腎毒性而在臨床應(yīng)用上得到限制。藥理實(shí)驗(yàn)證明,鹿茸提取物對(duì)順鉑誘導(dǎo)的小鼠腎毒性有一定的改善作用,但其有效成分并不明確。本文探究花鹿茸中與順鉑聯(lián)用對(duì)其起減毒增效作用的有效成分及其機(jī)制。采用超聲輔助法和水提醇沉法提取梅花鹿二杠茸中水溶性總蛋白和總多糖成分,通過Bradford法和苯酚硫酸法分別對(duì)其進(jìn)行純度測定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果得花鹿茸水溶性總蛋白的純度為86.35%,花鹿茸總多糖純度為82.45%。研究花鹿茸中水溶性成分的抗腫瘤活性及其機(jī)制。采用MTT法進(jìn)行花鹿茸總蛋白和花鹿茸總多糖對(duì)人肝癌細(xì)胞（HepG2）、人肺癌細(xì)胞（NCI-H460）和人前列腺癌（PC-3M）抗腫瘤活性的篩選,同時(shí)測定花鹿茸總蛋白和花鹿茸總多糖對(duì)人胚腎細(xì)胞（HEK 293）的細(xì)胞毒性。通過平板克隆實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Western蛋白印跡法進(jìn)行花鹿茸蛋白對(duì)PC-3M細(xì)胞抗腫瘤活性的機(jī)制研究。MTT法結(jié)果表明,花鹿茸總蛋白(200-800μg·mL^-1)對(duì)PC-3M有明顯抑制作用（P<0.01）,對(duì)HepG2和NCI-H460無明顯... 

【文章來源】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：56 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
第一章 中藥抗腫瘤機(jī)制和減輕順鉑腎毒性機(jī)制研究概況
    1.1 中藥抗腫瘤機(jī)制研究
        1.1.1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡
        1.1.2 抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移
        1.1.3 改善機(jī)體免疫功能
        1.1.4 抑制腫瘤端粒酶活性
    1.2 中藥減輕CDDP腎毒性的機(jī)制研究
        1.2.1 CDDP腎毒性的病理機(jī)制
        1.2.2 CDDP誘導(dǎo)的腎毒性的分子機(jī)制
    1.3 展望
第二章 花鹿茸水溶性有效部位的提取
    2.1 實(shí)驗(yàn)用品
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 花鹿茸水溶性總蛋白和總多糖的提取
        2.2.2 Bradford法測定鹿茸水溶性蛋白含量
        2.2.3 苯酚-硫酸法測定鹿茸水溶性多糖含量
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線
        2.3.3 鹿茸水溶性蛋白和多糖的純度
    2.4 討論
第三章 花鹿茸總蛋白和總多糖與順鉑聯(lián)用的體外抗腫瘤活性的研究
    3.1 實(shí)驗(yàn)用品
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 樣品溶液的配制
        3.2.2 抗腫瘤活性的篩選
        3.2.3 平板克隆實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 流式細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
        3.2.5 Western蛋白印跡法測定凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        3.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 花鹿茸總蛋白和總多糖的體外抗腫瘤活性的影響
        3.3.2 花鹿茸總蛋白對(duì)PC-3M細(xì)胞增殖的影響
        3.3.3 花鹿茸總蛋白對(duì)PC-3M細(xì)胞凋亡的影響
    3.4 討論
第四章 花鹿茸總蛋白減輕順鉑誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞毒性的研究
    4.1 實(shí)驗(yàn)用品
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        4.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    4.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        4.2.1 樣品溶液的配制
        4.2.2 細(xì)胞活力的測定
        4.2.3 氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定
        4.2.4 炎癥因子的測定
        4.2.5 Western蛋白印跡法測定凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        4.2.6 TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡
        4.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        4.3.1 花鹿茸總蛋白聯(lián)合順鉑對(duì)HEK293細(xì)胞活力的影響
        4.3.2 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響
        4.3.3 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥反應(yīng)的影響
        4.3.4 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡反應(yīng)的影響
    4.4 討論
第五章 花鹿茸總蛋白減輕順鉑誘導(dǎo)的小鼠腎毒性的研究
    5.1 實(shí)驗(yàn)用品
        5.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        5.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        5.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    5.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        5.2.1 樣品溶液的配制
        5.2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和給藥
        5.2.3 小鼠體質(zhì)量變化、腎重指數(shù)和腎功能測定
        5.2.4 氧化應(yīng)激指標(biāo)的測定
        5.2.5 ELISA測定血清和腎臟中TNF-α和IL-6的水平
        5.2.6 Western蛋白印跡法檢測細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)
        5.2.7 HE染色觀察組織病理學(xué)變化
        5.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    5.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        5.3.1 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)小鼠體質(zhì)量變化、腎重指數(shù)及腎功能的影響
        5.3.2 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響
        5.3.3 花鹿茸總蛋白對(duì)TNF-α和IL-6水平的影響
        5.3.4 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響
        5.3.5 花鹿茸總蛋白對(duì)順鉑誘導(dǎo)腎組織病理學(xué)變化的影響
    5.4 討論
第六章 花鹿茸蛋白的體內(nèi)安全性實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)
    6.1 實(shí)驗(yàn)用品
        6.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        6.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器
        6.1.3 實(shí)驗(yàn)試劑
    6.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
        6.2.1 急性口服毒性實(shí)驗(yàn)
        6.2.2 骨髓微核實(shí)驗(yàn)
        6.2.3 精子畸變實(shí)驗(yàn)
        6.2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    6.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.1 花鹿茸總蛋白的急性口服毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.2 花鹿茸總蛋白的骨髓微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        6.3.3 花鹿茸總蛋白的精子畸變實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    6.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]腎復(fù)舒顆粒對(duì)順鉑腎毒性小鼠的保護(hù)作用研究[J]. 曹思思,龔雙,顏苗,蔣云生,樊新榮,張畢奎.  中國臨床藥理學(xué)雜志. 2017(06)
[2]香菇中多糖含量測定方法的比較研究[J]. 周勇,易延逵,楊曉敏,李亞平.  食品研究與開發(fā). 2016(13)
[3]高壓脈沖電場法聯(lián)合提取鹿茸中蛋白質(zhì)、多糖的工藝優(yōu)化[J]. 董思敏,王海璐,王全凱,殷涌光,張晶.  中國藥學(xué)雜志. 2016(08)
[4]益氣補(bǔ)腎方藥對(duì)順鉑致大鼠腎臟氧化損傷的保護(hù)作用[J]. 連燕娜,高麗萍,王海,周綺云.  中國醫(yī)院藥學(xué)雜志. 2016(08)
[5]鎖陽多糖對(duì)肺癌細(xì)胞端粒的影響[J]. 楊帆,趙鵬偉,孫鵬,李蘭城,馬麗杰.  中國中藥雜志. 2016(05)
[6]梔子苷元及其包合物對(duì)人胰腺癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)增殖的抑制作用[J]. 黃小燕,趙源,米金霞,楊楊,丁越,張超超,張彤,蔡貞貞.  上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(04)
[7]Bradford法測量不同加工工藝鹿茸蛋白含量研究[J]. 靳夢亞,董玲,戴俊東,魏寶霞,朱美玲,侯成波,莫美,隗麗.  中華中醫(yī)藥學(xué)刊. 2015(03)
[8]順鉑致急性腎損傷的研究進(jìn)展[J]. 孟曉燕,黃向陽.  醫(yī)學(xué)綜述. 2014(21)
[9]牽牛子酒提取物對(duì)Lewis肺癌的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移機(jī)制研究[J]. 李佳桓,杜鋼軍,劉偉杰,劉迎輝,趙貝,李紅.  中國中藥雜志. 2014(05)
[10]中藥抗腫瘤機(jī)制的研究進(jìn)展[J]. 趙欣,白偉,房濤.  廣東醫(yī)學(xué). 2014(03)



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