桑黃和牛樟芝作為極珍貴的藥用真菌,其杰出的生理功效備受世人關(guān)注。目前主要是針對(duì)桑黃和牛樟芝的子實(shí)體進(jìn)行了較多的研究,但是這些真菌在野外生長緩慢,數(shù)量稀少,不利于大規(guī)模的研究和應(yīng)用。本文利用實(shí)驗(yàn)室固態(tài)發(fā)酵或液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)的桑黃和牛樟芝菌絲體,提取其中的多糖和三萜類物質(zhì),對(duì)其體外抗腫瘤活性、藥物作用時(shí)間、安全性、抗細(xì)胞遷移等活性進(jìn)行研究,并分析各活性組分對(duì)腫瘤細(xì)胞內(nèi)TOP1/TDP1介導(dǎo)的DNA損傷通路的抑制作用。主要結(jié)果如下:由桑黃和牛樟芝菌絲體中分離純化獲得以下四種活性物質(zhì):由固態(tài)發(fā)酵桑黃菌絲體提取獲得粗多糖組分PS;由液態(tài)發(fā)酵牛樟芝菌絲提取純化得到均一純化多糖組分ACPS-1;由固態(tài)發(fā)酵牛樟芝菌絲體提取獲得的三萜類混合物ACT-I和ACT-N。抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)表明,PS能抑制Hep G2、HeLa、Lovo、S180、H22細(xì)胞的體外增殖,最大抑制率為65.00%,92.38%,36.30%,61.83%,94.83%。ACPS-1能抑制A431、HeLa、S180、H22細(xì)胞的體外增殖,最大抑制率為36.89%,74.09%,70.61%,69.07%。ACT-I能抑制HeLa、S18... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：88 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語表
1 前言
    1.1 概述
    1.2 癌癥的常用治療手段
        1.2.1 手術(shù)治療
        1.2.2 放射治療
        1.2.3 化學(xué)治療
        1.2.4 生物治療
        1.2.5 中醫(yī)治療
        1.2.6 綜合治療
    1.3 抗腫瘤天然資源
        1.3.1 桑黃
        1.3.2 牛樟芝
    1.4 天然抗腫瘤活性組分
        1.4.1 多糖類
        1.4.2 三萜類
        1.4.3 黃酮類
        1.4.4 生物堿類
        1.4.5 其他類
    1.5 天然活性組分抗腫瘤作用機(jī)制
        1.5.1 提高免疫力
        1.5.2 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡
        1.5.3 影響信號(hào)傳遞
        1.5.4 影響核酸和蛋白質(zhì)合成
    1.6 TOP1/TDP1介導(dǎo)的DNA損傷修復(fù)通路
    1.7 本文研究意義及主要內(nèi)容
2 材料方法
    2.1 菌種和細(xì)胞
    2.2 主要試劑
    2.3 主要試驗(yàn)儀器
    2.4 方法
        2.4.1 桑黃粗多糖(PS)的獲取
        2.4.2 牛樟芝多糖(ACPS-1)的獲取
        2.4.3 牛樟芝三萜(ACT)的獲取
        2.4.4 腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)
        2.4.5 體外抗腫瘤活性
        2.4.6 藥物作用時(shí)間
        2.4.7 藥物安全性檢測
        2.4.8 腫瘤細(xì)胞蛋白濃度檢測
        2.4.9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        2.4.10 腫瘤細(xì)胞的凋亡和周期分析
        2.4.11 劃痕實(shí)驗(yàn)
    2.5 數(shù)據(jù)分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 PS的多糖含量
    3.2 ACPS-1的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)
    3.3 PS的抗腫瘤活性
        3.3.1 PS對(duì)HepG2細(xì)胞的影響
        3.3.2 PS對(duì)HeLa細(xì)胞的影響
        3.3.3 PS對(duì)H22細(xì)胞的影響
        3.3.4 PS對(duì)S180細(xì)胞的影響
        3.3.5 PS對(duì)Lovo細(xì)胞的影響
    3.4 ACPS-1的抗腫瘤活性
        3.4.1 ACPS-1對(duì)A431細(xì)胞的影響
        3.4.2 ACPS-1對(duì)HeLa細(xì)胞的影響
        3.4.3 ACPS-1對(duì)H22細(xì)胞的影響
        3.4.4 ACPS-1對(duì)S180細(xì)胞的影響
    3.5 ACT-I和ACT-N的抗腫瘤活性
        3.5.1 ACT對(duì)HeLa細(xì)胞的影響
        3.5.2 ACT對(duì)S180細(xì)胞的影響
    3.6 各活性組分安全性分析
        3.6.1 PS的安全性分析
        3.6.2 ACPS-1的安全性分析
        3.6.3 ACT-I和ACT-N的安全性分析
    3.7 各活性組分對(duì)TOP1/TDP1的影響
        3.7.1 PS對(duì)TOP1/TDP1的影響
        3.7.2 ACPS-1對(duì)TOP1/TDP1的影響
        3.7.3 ACT-I和ACT-N對(duì)TOP1/TDP1的影響
    3.8 各活性組分對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和周期的影響
        3.8.1 PS對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和周期的影響
        3.8.2 ACPS-1對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和周期的影響
        3.8.3 ACT-I和ACT-N對(duì)腫瘤細(xì)胞凋亡和周期的影響
    3.9 各活性組分對(duì)腫瘤細(xì)胞遷移的影響
4 小結(jié)與討論
    4.1 小結(jié)
    4.2 討論
        4.2.1 各活性組分基本特性
        4.2.2 各活性組分的抗腫瘤效果
        4.2.3 各活性組分的安全性
        4.2.4 TOP1/TDP1通路
        4.2.5 多種抑癌途徑
    4.3 展望
參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[3]CAPE對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞增殖凋亡及NF-κB信號(hào)通路影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 蔣超.南華大學(xué) 2011
[4]“桑黃”的鑒定、人工培養(yǎng)及優(yōu)良菌株的選育[D]. 曾念開.中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué) 2007
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本文編號(hào)：3192092