發(fā)布時(shí)間：2021-05-17 13:03

　　目的:運(yùn)用現(xiàn)代中藥學(xué)研究方法、采用小鼠模型試驗(yàn)、體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),探索壯瑤民族常用藥扶芳藤黃酮的提取工藝并研究其對(duì)衰老模型的影響來(lái)探究其可能的抗衰老作用機(jī)制,為進(jìn)一步開發(fā)作用機(jī)制明確的新型抗衰老及衰老相關(guān)疾病藥物提高理論依據(jù)。方法:（1）以超聲輔助提取-乙酸乙酯萃取-D101大孔樹脂吸附為提取方法,通過單因素試驗(yàn),分別得到扶芳藤總黃酮提取的最佳反應(yīng)溫度、最佳料液比、最佳反應(yīng)時(shí)間,在此基礎(chǔ)上,以扶芳藤總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),以反應(yīng)溫度、料液比、提取時(shí)間為影響因素,正交試驗(yàn)L9（3³）法優(yōu)化提取工藝,確定扶芳藤總黃酮提取的最佳條件。并在此條件下,對(duì)扶芳藤總黃酮進(jìn)行提取分離純化。（2）構(gòu)建D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠模型,取60只健康雄性昆明小鼠,隨機(jī)分為6組,即正常組、模型組、黃芪多糖陽(yáng)性對(duì)照組（40mg/kg）、扶芳藤總黃酮提取物濃度高（0.8g/ml）、中（0.4g/ml）、低（0.2g/ml）劑量組。在6周喂養(yǎng)后,檢測(cè)各組小鼠血清、心肌組織及肝組織中的過氧化氫酶（CAT）、總抗氧化能力（T-AOC）以及谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活性。（3）... 

【文章來(lái)源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁(yè)數(shù)】：85 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
前言
實(shí)驗(yàn)一 扶芳藤總黃酮提取工藝優(yōu)化及提純純化
    1 材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)藥材來(lái)源
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 測(cè)定波長(zhǎng)的確定
        2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        2.3 扶芳藤總黃酮的提取
            2.3.1 樣品材料預(yù)處理
            2.3.2 超聲波提取
            2.3.3 萃取
        2.4 單因素試驗(yàn)提取條件的確定
            2.4.1 提取溫度對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
            2.4.2 料液比對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
            2.4.3 提取時(shí)間對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
        2.5扶芳藤總黃酮提取的正交實(shí)驗(yàn)
        2.6 扶芳藤總黃酮的純化
            2.6.1 D101大孔樹脂吸附
            2.6.2 總黃酮含量測(cè)定
        2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 波長(zhǎng)的確定結(jié)果
        3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制
        3.3 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果
            3.3.1 提取溫度對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
            3.3.2 料液比對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
            3.3.3 提取時(shí)間對(duì)扶芳藤總黃酮含量的影響
        3.4 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.5 扶芳藤總黃酮提取結(jié)果
    4 分析與討論
實(shí)驗(yàn)二 扶芳藤總黃酮提取物對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠的影響
    1 材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥物來(lái)源
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 動(dòng)物分組與給藥
        2.2 樣本的采集
        2.3 生化指標(biāo)的測(cè)定
            2.3.1 總蛋白濃度測(cè)定
            2.3.2 過氧化氫酶(CAT)活性
            2.3.3 谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性
            2.3.4 總抗氧化能力(T-AOC)活性
        2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠模型的建立
        3.2 BCA標(biāo)準(zhǔn)蛋白曲線
        3.3 扶芳藤總黃酮提取物對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠血清中T-AOC、CAT、GSH-PX的影響
        3.4 扶芳藤總黃酮提取物對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠心肌組織中T-AOC、CAT、GSH-PX的影響
        3.5 扶芳藤總黃酮提取物對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠肝組織中T-AOC、CAT、GSH-PX的影響
    4 討論與分析
實(shí)驗(yàn)三 扶芳藤黃酮單體提取分離純化
    1 材料與儀器
        1.1 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.2 儀器與設(shè)備
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 藥材預(yù)處理
        2.2 大孔樹脂分離
        2.3 HPLC色譜條件
        2.4 HPLC過程
        2.5 液相-質(zhì)譜聯(lián)用條件
        2.6 液相-質(zhì)譜聯(lián)用鑒定
    3 結(jié)果
        3.1 HPLC提純純化結(jié)果
        3.2 各個(gè)樣品的HPLC圖譜
    4 分析與討論
實(shí)驗(yàn)四 扶芳藤黃酮對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)衰老HUVEC細(xì)胞的影響
    1 試劑與儀器
        1.1 細(xì)胞來(lái)源
        1.2 試劑與試劑盒
        1.3 儀器與設(shè)備
        1.4 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.2 細(xì)胞傳代
        2.3 細(xì)胞計(jì)數(shù)
        2.4 細(xì)胞凍存
        2.5 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.6 血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞衰老模型
        2.7 MTT法檢測(cè)扶芳藤黃酮單體對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)衰老HUVEC細(xì)胞增殖的影響
        2.8 β-半乳糖苷酶染色法檢測(cè)扶芳藤黃酮單體對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)衰老HUVEC細(xì)胞增殖的影響
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞誘導(dǎo)衰老模型的建立
        3.2 AngⅡ誘導(dǎo)HUVEC細(xì)胞誘導(dǎo)衰老模型建立的條件摸索
        3.3 MTT法檢測(cè)結(jié)果
        3.4 β-半乳糖苷酶染色法檢測(cè)結(jié)果
    4 分析與討論
全文小結(jié)
參考文獻(xiàn)
綜述
    綜述參考文獻(xiàn)
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【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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[2]人參葉多糖的提取工藝及其對(duì)斷奶仔豬生產(chǎn)性能的影響研究[D]. 黃彥.華南農(nóng)業(yè)大學(xué) 2018
[3]小鼠博來(lái)霉素多次染毒肺纖維化模型建立及ABT263治療作用觀察[D]. 陳孟毅.北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2017
[4]扶芳藤化學(xué)成分研究[D]. 楊穎達(dá).中南民族大學(xué) 2010
[5]生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖影響的實(shí)驗(yàn)研究[D]. 余繼海.安徽醫(yī)科大學(xué) 2003



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