云南松（Pinus yunnanensis）花粉多糖及硫酸酯化多糖在體外細胞水平上的研究較多,實驗室前期的實驗表明松花粉多糖及硫酸酯化多糖能夠在體外促進巨噬細胞的增殖并活化其免疫作用,且表明能夠通過細胞周期阻滯的方式抑制人肝癌細胞HepG2的增殖。本實驗對松花粉多糖及硫酸酯化多糖的抗腫瘤作用及免疫影響進行研究,將體外與體內實驗結合起來進行探究,建立小鼠H22肝癌移植模型,并且對小鼠血清進行核磁共振分析,結合代謝組學分析荷瘤小鼠在松花粉多糖及酯化多糖作用前后對體外H22細胞、荷瘤小鼠血清細胞因子及血清中的代謝物質的影響,共同探究酯化前后的松花粉在抗腫瘤方面的作用及差異。一、對云南松花粉多糖進行提取、檢測以及純化。對多糖的提取采用的是熱水浸提法,利用三氯乙酸去除蛋白質,用不同濃度的乙醇進行分級沉淀,得到60%的乙醇所沉淀出來的多糖,并將其命名為PPM60。對其進行多糖含量的測定,測得多糖含量為44.02%。利用常壓制備色譜技術對PPM60進行分離純化,并得到五個多糖組分,同樣利用常壓色譜技術對得到的五個多糖組分進行純度檢測,最終選用純度及活性較合適的第三組分,并將其命名為PC。二、對PC進... 

【文章來源】：山東師范大學山東省

【文章頁數】：67 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
第一章 綜述
    1 松花粉
    2 多糖和硫酸酯化多糖以及其在抗腫瘤方面的研究現(xiàn)狀
        2.1 多糖及其研究現(xiàn)狀
        2.2 硫酸化多糖及其研究現(xiàn)狀
    3 基于核磁共振(NMR)技術的代謝組學
    4 本課題的研究基礎,研究目的及研究意義
第二章 松花粉粗多糖的分離純化、硫酸酯化以及檢測
    1 材料與試劑
    2 儀器與設備
    3 實驗步驟
        3.1 制備云南松花粉多糖
        3.2 破壁松花粉粗多糖含量的測定
        3.3 常壓制備色譜分析技術分離純化松花粉粗多糖
        3.4 對分離純化的松花粉粗多糖進行純度檢測
        3.5 制備磺化試劑
        3.6 松花粉多糖的硫酸酯化、脫氨以及純化
        3.7 硫酸酯化多糖取代度的檢測
        3.8 紅外光譜檢測
    4 實驗結果
        4.1 松花粉多糖含量為44.02%
        4.2 松花粉多糖的分離結果
        4.3 松花粉多糖的純度檢測
    5 松花粉多糖(PC)的硫酸酯化及紅外光譜檢測
        5.1 硫酸酯化多糖(SPC)取代度為1.7
        5.2 PC和 SPC紅外光譜檢測
    6 討論
第三章 多糖酯化前后對H22細胞活性、細胞遷移以及細胞周期的影響
    1 材料和試劑
    2 儀器與設備
    3 方法步驟
        3.1 試劑配制
        3.2 細胞培養(yǎng)
        3.3 MTT實驗
        3.4 細胞劃痕愈合實驗
        3.5 流式細胞儀(FCM)檢測H22 細胞周期
        3.6 熒光定量PCR檢測細胞周期相關基因mRNA表達量
    4 實驗結果
        4.1 MTT結果表明PC和 SPC均能抑制H22 細胞的增殖
        4.2 PC和 SPC對 H22 細胞劃痕愈合能力具有抑制作用
        4.3 PC和 SPC引起H22 細胞周期阻滯
        4.4 多糖酯化前后對H22 細胞周期有關基因表達量的影響
    5 討論
第四章 多糖酯化前后對H22荷瘤小鼠的影響
    1 材料與試劑
        1.1 實驗動物及細胞系
        1.2 主要試劑及儀器
    2 實驗過程
        2.1 細胞培養(yǎng)與小鼠腹水傳代
        2.2 BALB/C小鼠H22 肝癌移植模型建立
        2.3 預實驗
        2.4 正式實驗
        2.5 小鼠血清細胞因子的測定
        2.6 小鼠血清核磁共振(~1H-NMR)預處理
        2.7 ~1H-NMR實驗條件及譜圖分析
    3 實驗結果
        3.1 多糖及硫酸酯化多糖對荷瘤小鼠瘤重的影響
        3.2 血清中細胞因子的測定
        3.3 血清核磁共振(1H-NMR)檢測
        3.4 核磁差異性代謝物分析
        3.5 代謝通路分析
    4 討論
結論
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3184714