該研究通過使用CRISPR/CAS9基因編輯技術(shù),成功在實(shí)驗(yàn)室前期保存的產(chǎn)β-香樹脂醇釀酒酵母細(xì)胞中敲除編碼胞質(zhì)蘋果酸合成酶（citrate synthase,CIT2）和過氧化物酶體檸檬酸合酶（malate synthase,MLS1）的CIT2和MLS1基因,并將編碼磷酸葡糖異構(gòu)酶（phosphoglucose isomerase,PGI1）的PGI1基因啟動子替換成編碼酵母線粒體蛋白細(xì)胞色素c氧化酶亞基Ⅶa（cytochrome c oxidase subunitⅦa）的核基因Cox9的啟動子,從而弱化PGI1基因的表達(dá),調(diào)節(jié)乙酰輔酶A和胞內(nèi)NADPH供給,進(jìn)而調(diào)控β-香樹脂醇的產(chǎn)量。發(fā)酵實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,刪除CIT2基因?qū)Ζ?香樹脂醇的產(chǎn)量沒有影響;刪除MLS1基因后,β-香樹脂醇的產(chǎn)量是對照菌株的1.85倍,達(dá)到了3.3 mg·L^-1。弱化PGI1基因表達(dá)后,β-香樹脂醇的產(chǎn)量是對照菌株的3.75倍,達(dá)6.7 mg·L^-1。該研究通過使用CRISPR/CAS9基因敲除技術(shù)成功的敲除CIT2和MLS1基因并弱化PGI1基因,提高了β-香樹... 

【文章來源】：中國中藥雜志. 2020,45(16)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：7 頁

【文章目錄】：
1 材料
    1.1 工具酶與試劑
    1.2 質(zhì)粒、菌株與引物
    1.3 培養(yǎng)基
2 方法
    2.1 基因敲除組件的構(gòu)建
    2.2 酵母轉(zhuǎn)化
    2.3 發(fā)酵及產(chǎn)物的提取
    2.4 鯊烯、麥角固醇、羊毛甾醇及β-香樹脂醇檢測分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 基因敲除陽性菌株的驗(yàn)證
    3.2 菌株代謝流變化
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]產(chǎn)β-香樹脂醇釀酒酵母細(xì)胞構(gòu)建及高密度發(fā)酵[J]. 孫夢楚,晁二昆,蘇新堯,朱敏,蘇勇,錢廣濤,陳士林,王彩霞,薛建平.  中國中藥雜志. 2019(07)
[2]創(chuàng)建釀酒酵母細(xì)胞工廠高效生產(chǎn)人參皂苷前體達(dá)瑪烯二醇Ⅱ[J]. 王冬,劉怡,許驕陽,王金鶴,戴住波,張學(xué)禮,黃璐琦.  藥學(xué)學(xué)報. 2018(08)
[3]紫杉醇生物合成途徑及合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 匡雪君,王彩霞,鄒麗秋,李瀅,孫超.  中國中藥雜志. 2016(22)
[4]中藥功效成分合成生物學(xué)研究進(jìn)展[J]. 蘇新堯,薛建平,王彩霞.  中國中藥雜志. 2016(22)



本文編號：3174838