目的:肝細(xì)胞癌（HCC）是臨床常見(jiàn)的實(shí)體瘤之一,在全球最常見(jiàn)癌癥中致死率排名第三,是一種嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病。目前治療HCC的方法有限,僅部分患者在發(fā)病時(shí)可行手術(shù)治療,且復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率超過(guò)60%,治療效果欠佳;FDA批準(zhǔn)的晚期肝癌治療藥物多靶向小分子激酶抑制劑索拉非尼（Sorafenib）僅能延長(zhǎng)壽命2-3個(gè)月,且易出現(xiàn)不良事件。因此,研究HCC發(fā)生的分子機(jī)制,探討其新的治療方法就顯得尤為重要和迫切。原癌基因突變或異常表達(dá)引起細(xì)胞信號(hào)通路失控,從而介導(dǎo)細(xì)胞異常增殖或抑制細(xì)胞程序性死亡,最終形成HCC,是肝細(xì)胞癌變的主要機(jī)制之一。研究表明,原癌基因AKT與c-Met過(guò)表達(dá)或異常激活是HCC發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的高頻事件,針對(duì)AKT或c-Met介導(dǎo)HCC發(fā)生發(fā)展的作用機(jī)制已有報(bào)道。然而,AKT與c-Met在肝癌發(fā)形成中的協(xié)同作用及分子機(jī)制,至今仍不十分清楚。雷公藤紅素（Celastrol,又名南蛇藤素）是從中藥雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）、南蛇藤（Celastrus orbiculatus Thunb.）等衛(wèi)矛科植物中的單體化合物,對(duì)結(jié)腸癌、肺癌、肝癌... 

【文章來(lái)源】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：132 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞表
前言
第一章 AKT/c-Met共表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌的快速形成研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)試劑
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒提取及鑒定
        2.2 注射質(zhì)粒溶液的配制
        2.3 高壓尾靜脈轉(zhuǎn)染法
        2.4 實(shí)驗(yàn)分組
        2.5 小鼠腫瘤大體形態(tài)檢測(cè)
        2.6 蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosinstaining,HE)
        2.7 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry,IHC)染色
        2.8 組織中RNA提取和即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative Real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)檢測(cè)
        2.9 溶液配制
        2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 同時(shí)共轉(zhuǎn)染AKT和c-Met誘導(dǎo)小鼠肝臟腫瘤的快速形成
        3.2 AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠腫瘤形成是由于轉(zhuǎn)染AKT和c-Met引起
        3.3 AKT和c-Met誘導(dǎo)的肝臟腫瘤組織學(xué)形態(tài)為肝細(xì)胞癌
        3.4 AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠腫瘤的分子生物學(xué)特征為肝癌
    4 小結(jié)與討論
第二章 AKT/c-Met共表達(dá)促進(jìn)肝細(xì)胞癌形成的分子機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 細(xì)胞系
        1.3 體外實(shí)驗(yàn)用藥物
        1.4 主要試劑及耗材
        1.5 抗體
        1.6 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.0 質(zhì)粒提取及鑒定
        2.1 shRNA的構(gòu)建
        2.2 注射質(zhì)粒溶液的配制
        2.3 高壓尾靜脈轉(zhuǎn)染法
        2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組
        2.5 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.6 細(xì)胞藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn)
        2.7 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
        2.8 細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)
        2.9 組織/細(xì)胞蛋白的提取和Westernbloting
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 AKT/c-Met共表達(dá)促進(jìn)AKT/mTOR和Ras/MAPK信號(hào)通路的激活
        3.2 沉默Raptor基因可抑制AKT/c-Met共表達(dá)誘導(dǎo)的小鼠HCC形成
        3.3 敲除FASN基因可抑制AKT/c-Met共表達(dá)誘導(dǎo)的小鼠肝癌形成
        3.5 聯(lián)合抑制AKT和c-Met不利于人源肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)
    4 小結(jié)與討論
第三章 AKT、c-Met和FASN在人體HCC中共表達(dá)研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 主要試劑及耗材
        1.2 抗體
        1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
        1.4 人體HCC病理標(biāo)本
    2 實(shí)驗(yàn)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    4 小結(jié)與討論
第四章 雷公藤紅素抗AKT/c-Met誘導(dǎo)的HCC作用及機(jī)制研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 體外實(shí)驗(yàn)用藥物
        1.3 主要試劑及耗材
        1.4 抗體
        1.5 主要儀器
        1.6 給藥溶液的配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 質(zhì)粒提取及鑒定
        2.2 注射質(zhì)粒溶液配制
        2.3 高壓尾靜脈轉(zhuǎn)染法
        2.4 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)分組
        2.5 蘇木精-伊紅(HE)染色
        2.6 免疫組織化學(xué)(IHC)染色
        2.7 組織中RNA提取和即時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)
        2.8 組織蛋白的提取和Westernbloting
        2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 Celastrol有效的抑制AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠HCC的腫瘤生長(zhǎng)
        3.2 Celastrol減輕AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠HCC肝臟病理學(xué)變化
        3.3 Celastrol降低AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠HCC肝臟和血清中肝癌標(biāo)志物的表達(dá)水平
        3.4 Sorafenib對(duì)AKT/c-Met誘導(dǎo)的小鼠HCC無(wú)效
        3.5 Celastrol下調(diào)AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠HCC肝臟中Ki67和PCNA的表達(dá)水平
        3.6 Celastrol抑制AKT/c-Met誘導(dǎo)小鼠HCC肝臟中AKT/mTOR和Ras/MAPK相關(guān)蛋白的表達(dá)水平
    4 小結(jié)與討論
第五章 雷公藤紅素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體的制備、表征及細(xì)胞學(xué)行為初步研究
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 藥品及試劑
        1.2 主要儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 雷公藤紅素體外分析方法的建立
        2.2 脂質(zhì)體包封率的測(cè)定
        2.3 雷公藤紅素脂質(zhì)體(Celastrol/L)的制備
        2.4 雷公藤紅素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(Celastrol/PEG-L)的制備及表征
        2.5 Celastrol/PEG-L貯存穩(wěn)定性考察
        2.6 Celastrol/PEG-L凍干工藝的考察
        2.7 體外釋放行為研究
        2.8 細(xì)胞攝取動(dòng)力學(xué)
        2.9 雷公藤紅素及脂質(zhì)體細(xì)胞毒作用
    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.1 雷公藤紅素體外分析方法的建立
        3.2 過(guò)膜法測(cè)定脂質(zhì)體包封率的驗(yàn)證
        3.3 雷公藤紅素脂質(zhì)體(Celastrol/L)的制備
        3.4 雷公藤紅素長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體(Celastrol/PEG-L)的制備及表征
        3.5 Celastrol/PEG-L貯存穩(wěn)定性考察
        3.6 Celastrol/PEG-L凍干工藝的考察
        3.7 雷公藤紅素普通脂質(zhì)體和長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體體外釋放
        3.8 細(xì)胞攝取動(dòng)力學(xué)
        3.9 細(xì)胞毒作用
    4 小結(jié)與討論
結(jié)語(yǔ)
參考文獻(xiàn)
附錄1 肝細(xì)胞癌的研究進(jìn)展
附錄2 攻博期間獲得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]葡萄糖修飾腦靶向紫杉醇脂質(zhì)體包封率測(cè)定方法的比較[J]. 聶華,趙瑩,葉小玲,丘明建,廖勇濤,何志龍,張聲源.  中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2016(23)
[2]Molecularly targeted therapy for advanced hepatocellular carcinoma-a drug development crisis?[J]. Kiruthikah Thillai,Paul Ross,Debashis Sarker.  World Journal of Gastrointestinal Oncology. 2016(02)
[3]Current status and perspectives of immune-based therapies for hepatocellular carcinoma[J]. Maridi Aerts,Daphné Benteyn,Hans Van Vlierberghe,Kris Thielemans,Hendrik Reynaert.  World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[4]坦西莫司脂質(zhì)體凍干劑的制備及大鼠藥代動(dòng)力學(xué)[J]. 李楠,莫然,張燦.  中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(03)
[5]Diagnostic value of glypican-3 in serum and liver for primary hepatocellular carcinoma[J]. Hui Liu,Li-Jie Zhang,Department of Pathology,Beijing Youan Hospital,Capital Medical University,Beijing 100069,China Peng Li,Yun Zhai,Yu-Fen Tan,Ning Li,Hui-Guo Ding,Department of Hepatology and Gastroenterology,Beijing Youan Hospital,Capital Medical University,Beijing 100069,China Chun-Feng Qu,State Key Laboratory of Molecular Oncology,Cancer Institute/Hospital,Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College,Beijing 100021,China.  World Journal of Gastroenterology. 2010(35)
[6]雷公藤紅素對(duì)U937細(xì)胞Notch 1、NF-κB信號(hào)蛋白通路的調(diào)控作用[J]. 王曉南,吳青,楊旭,張連生,吳一品,盧聰.  癌癥. 2010(04)
[7]Metastatic human hepatocellular carcinoma models in nude mice and cell line with metastatic potential[J]. Zhao-You Tang Fan-Xian Sun Jian Tian Sheng-Long Ye Yin-Kun Liu Kang-Da Liu Qiong Xue Jie Chen Jing-Lin Xia Lun-Xiu Qin Hui-Chuan Sun Lu Wang Jian Zhou Yan Li Zeng-Chen Ma Xin-Da Zhou Zhi-Quan Wu Zhi-Ying Lin Bing-Hui Yang Liver Cancer Institute of Fudan University and Zhongshan Hospital,Shanghai 200032,China.  World Journal of Gastroenterology. 2001(05)



本文編號(hào)：3173769