EGCG是茶葉中含量最高,最具生物活性的兒茶素化合物,具有抗氧化、抗炎等功效。但EGCG不穩(wěn)定,容易發(fā)生氧化聚合,差相異構或水解反應,除此以外,EGCG在攝入人體后在胃腸道消化過程中破壞嚴重,導致其生物利用率低下,因此制約了 EGCG在功能食品和醫(yī)藥領域中的應用。本課題組前期研究表明米糠提取物能夠有效負載茶葉中主要兒茶素類成分EGCG,同時可以提高EGCG的生物利用率。本論文在前期研究的基礎上,通過自組裝制備微米級EGCG-RBAI復合物（RBAI:米糠白蛋白提取物）,研究其在pH7.4PBS溶液和模擬胃腸道消化液中的穩(wěn)定性;基于抗氧化能力優(yōu)化EGCG-RBAI復合物配方,用于細胞實驗;建立IL-1β誘導HT-29細胞炎癥模型,通過分組處理（IL-1β誘導模型組、對照組、EGCG、RBAI、EGCG-RBAI三種預處理組）研究和比較其抑制細胞炎癥發(fā)生的效果,采用qPCR法檢測MAPK、NF-κB和STAT炎癥相關信號通路及其下游基因的表達差異,采用酶聯(lián)免疫試劑盒檢測細胞因子IL-8及PGE2水平驗證炎癥發(fā)生,采用生化檢測試劑盒檢測抗氧化標記物SOD活力和MDA濃度探究細胞氧化應激響應變... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
致謝
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 文獻綜述
    1.1 EGCG的理化性質(zhì)
    1.2 EGCG生物利用率
    1.3 微膠囊包埋技術提高EGCG穩(wěn)定性
    1.4 EGCG的抗炎作用及機理
        1.4.1 EGCG對機體氧化-還原狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用
        1.4.2 EGCG對炎癥因子水平的調(diào)節(jié)作用
        1.4.3 EGCG對炎癥相關通路的調(diào)控作用
    1.5 炎癥性腸病的發(fā)生及防治
    1.6 本研究的目的、意義及主要內(nèi)容
第二章 RBAI負載對EGCG穩(wěn)定性的影響
    2.1 引言
    2.2 材料和方法
        2.2.1 實驗材料
        2.2.2 實驗設備
        2.2.3 RBAI的制備
        2.2.4 EGCG-RBAI復合物制備
        2.2.5 考馬斯亮藍法檢測蛋白質(zhì)濃度
        2.2.6 穩(wěn)定性實驗
        2.2.7 體外模擬胃腸道消化實驗
        2.2.8 HPLC法檢測EGCG濃度
        2.2.9 數(shù)據(jù)處理
    2.3 結果與討論
        2.3.1 RBAI的蛋白質(zhì)成分分析
        2.3.2 RBAI負載對EGCG在pH 7.4 PBS中穩(wěn)定性的影響
        2.3.3 RBAI負載對EGCG在模擬胃腸道消化液中穩(wěn)定性的影響
    2.4 小結
第三章 HT-29細胞炎癥模型建立及毒性檢測
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料和試劑
        3.2.2 儀器設備
        3.2.3 HT-29細胞培養(yǎng)方法
        3.2.4 MTT法檢測細胞存活率
        3.2.5 分組預處理實驗和IL-1β誘導HT-29細胞炎癥
        3.2.6 實時熒光定量PCR （qPCR）分析基因表達
        3.2.7 數(shù)據(jù)處理
    3.3 結果與討論
        3.3.1 不同濃度EGCG對HT-29細胞存活率的影響
        3.3.2 RBAI濃度對HT-29細胞存活率的影響
        3.3.3 EGCG- RBAI復合物配方對HT-29細胞存活率的影響
        3.3.4 EGCG預處理對炎癥生物標記基因表達的影響
        3.3.5 RBAI預處理對炎癥生物標記基因表達的影響
    3.4 小結
第四章 EGCG-RBAI復合物對炎癥相關信號通路激活的抑制作用
    4.1 引言
    4.2 材料和方法
        4.2.1 材料和試劑
        4.2.2 儀器設備
        4.2.3 細胞實驗用不同配方EGCG-RBAI復合物的制備
        4.2.4 ORAC法檢測抗氧化能力
        4.2.5 細胞預處理實驗
        4.2.6 qPCR法定量檢測基因表達
        4.2.7 IL-8和PGE2濃度檢測方法
        4.2.8 數(shù)據(jù)處理
    4.3 結果與討論
        4.3.1 細胞實驗用EGCG-RBAI配方篩選
        4.3.2 不同預處理對炎癥相關主要信號通路基因表達的影響
        4.3.3 不同預處理對通路下游炎癥相關基因表達的影響
        4.3.4 不同預處理對細胞上清液IL-8和PGE2水平的影響
        4.3.5 不同預處理對炎癥相關基因表達及炎癥因子分泌的影響分析
    4.4 小結
第五章 EGCG-RBAI復合物對細胞氧化應激響應的調(diào)節(jié)作用
    5.1 引言
    5.2 材料與方法
        5.2.1 實驗細胞系
        5.2.2 實驗材料
        5.2.3 實驗設備
        5.2.4 細胞預處理實驗
        5.2.5 qPCR法定量檢測Nrf2基因表達
        5.2.6 SOD活力檢測
        5.2.7 MDA含量檢測
        5.2.8 數(shù)據(jù)處理
    5.3 結果與討論
        5.3.1 不同預處理對細胞氧化應激響應的調(diào)節(jié)作用
        5.3.2 不同預處理對細胞氧化應激響應的影響分析
        5.3.3 IL-1β誘導HT-29細胞炎癥發(fā)生機制探討
    5.4 小結
第六章 結論與展望
    6.1 結論
    6.2 展望
參考文獻


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
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本文編號：3149262