目的通過研究訶子鞣酸對烏頭堿致H9C2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用,探討蒙藥訶子制草烏炮制減毒機(jī)制。方法以不同濃度的烏頭堿、訶子鞣酸及烏頭堿+訶子鞣酸分別作用于H9C2細(xì)胞,利用高內(nèi)涵分析（HCA）技術(shù)檢測并分析藥物對H9C2細(xì)胞數(shù)量、細(xì)胞核面積、細(xì)胞核DNA含量、Ca²⁺熒光強(qiáng)度及線粒體功能的影響。結(jié)果 10、20μmol/L烏頭堿作用于H9C2細(xì)胞24 h后,可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺超載;20μmol/L烏頭堿可致H9C2細(xì)胞線粒體功能障礙;5、10、20μmol/L訶子鞣酸單獨(dú)作用于H9C2細(xì)胞均無明顯毒性;當(dāng)10、20μmol/L訶子鞣酸與20μmol/L烏頭堿共同作用于H9C2細(xì)胞24 h后,線粒體功能恢復(fù),細(xì)胞內(nèi)Ca²⁺熒光強(qiáng)度降低;與對照組相比,無明顯差異。結(jié)論烏頭堿會引起H9C2細(xì)胞Ca²⁺超載和線粒體功能障礙,可能是草烏致心肌細(xì)胞毒性的主要原因。訶子中的訶子鞣酸可明顯抑制由烏頭堿引起的Ca²⁺超載,改善線粒體功能,起到解草烏毒的作用。 

【文章來源】：北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2020,43(08)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

不同濃度多柔比星對H9C2細(xì)胞的作用 (× 200)

表2 不同濃度烏頭堿作用于H9C2細(xì)胞24 h的細(xì)胞毒性 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 2 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 組別 Groups 濃度Concentration(μmol/L) 細(xì)胞數(shù)量Number of cells 細(xì)胞核面積Nuclear area (μm2) 細(xì)胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+熒光強(qiáng)度Ca2+ fluorescence intensity 線粒體膜電位Mitochondrial membrane potential 對照組Control group 54.38±8.96 193.10±7.72 8 623.24±755.50 7 698.28±842.10 4 173.35±423.50 烏頭堿組 5 65.88±9.64 187.21±14.07 8 874.45±512.40 8 464.45±649.90 4 229.23±146.30 Aconitine group 10 63.50±9.67 178.15±12.77 9 707.50±600.70* 10 014.36±1 042.05** 4 332.51±160.20 20 55.13±11.86 192.30±10.97 8 959.22±313.10 10 371.65±704.00** 4 998.45±233.30** F 1.20 2.11 4.04 14.02 12.49 P 0.146 5 0.130 7 0.021 3 <0.000 1 <0.000 1 注:與對照組比較*P<0.05 **P<0.01。Note: *P<0.05 **P<0.01 compared with the control group.3.3 訶子鞣酸對H9C2細(xì)胞的作用

草烏為中醫(yī)、蒙醫(yī)常用藥,生草烏含有大量劇毒雙酯型生物堿,2015版《中國藥典》規(guī)定必須先煎久煎,以降低毒性。在蒙醫(yī)臨床應(yīng)用中,草烏常配伍大量訶子使用以達(dá)到解毒目的�，F(xiàn)代研究表明,蒙藥訶子有保護(hù)心肌、緩解烏頭堿對心肌毒性的作用[18];訶子提取物可減輕H2O2對心肌細(xì)胞的損傷程度,對心肌細(xì)胞具有保護(hù)作用,其機(jī)制可能與穩(wěn)定細(xì)胞膜和抗氧化有關(guān)[10]。表4 不同濃度訶子鞣酸對烏頭堿致H9C2細(xì)胞毒性的作用 ( x ˉ ±s ; n=6)Table 4 Results of multi-parameter analysis of cytotoxicity of Chebulagic acid +Aconitine on H9C2 cells after 24h( x ˉ ±s ; n=6) 組別Groups 濃度 Concentration (μmol/L) 細(xì)胞數(shù)量Number of cells 細(xì)胞核面積Nuclear area (μm2) 細(xì)胞核DNA含量Nuclear DNA content (pg) Ca2+熒光強(qiáng)度Ca2+ fluorescence intensity 線粒體膜電位Mitochondrial membrane potential 訶子鞣酸Chebulagic acid 烏頭堿Aconitine 對照組Control group 54.25±11.97 181.40±8.95 9 436.53±417.20 8 410.26±561.10 3 478.48±634.20 烏頭堿組Aconitine group 20 45.13±11.86 180.30±8.90 9 440.24±553.00 10 571.08±544.00** 4 765.16±136.10** 訶子鞣酸組+烏頭堿組 Chebulagic acid + aconitine group 5 20 57.88±14.22 187.70±8.82 9 692.36±418.60 10 104.43±412.20 4 334.34±249.90 10 20 60.00±15.25 184.20±8.98 9 269.49±971.40 9 674.27±473.10# 4 158.02±25.06# 20 20 58.38±12.37 192.20±9.86 9 330.35±793.30 8 500.38±328.60## 3 785.15±134.10## F 1.64 2.28 1.10 33.43 18.44 P 0.187 1 0.079 9 0.416 8 <0.000 1 <0.000 1 注:與對照組比較**P<0.01;與烏頭堿組比較#P<0.05 ##P<0.01。Note: **P<0.01 compared with the control group; #P<0.05 ##P<0.01 compared with aconitine group.

【參考文獻(xiàn)】：
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