目的:探討哈蟆油蛋白酶解物（Oviductus Ranae protein hydrolysate,ORPH）對骨質(zhì)疏松模型大鼠保護(hù)作用,建立骨質(zhì)疏松大鼠定量蛋白組學(xué),并進(jìn)行生物信息學(xué)分析,闡述ORPH抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制。方法:采用堿性蛋白酶酶解法制備ORPH,并利用紫外光譜、紅外光譜、蛋白特征顯色、SDS-PAGE電泳、氨基酸色譜等方法鑒定ORPH的相關(guān)理化性質(zhì)。利用H₂O₂損傷MC3T3-E1細(xì)胞,MTT法篩選ORPH最佳給藥濃度和時(shí)間。利用去勢法復(fù)制骨質(zhì)疏松大鼠模型,用X-光射線法測定大鼠骨密度（Bone mineral density,BMD）,用改良Trizol法制備總RNA,qPCR法檢測骨代謝相關(guān)基因mRNA表達(dá)水平,Western-blotting法檢測骨代謝相關(guān)蛋白表達(dá)水平,HE染色法觀察股骨骨小梁結(jié)構(gòu)變化,免疫組化法評價(jià)堿性磷酸酯酶（Alkaline phosphatase,ALP）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2（Bone morphogenetic protein2,BMP2）的蛋白表達(dá)水平。TMT標(biāo)記法標(biāo)記胰蛋白酶水解后肽段,... 

【文章來源】：長春中醫(yī)藥大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：130 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

正常人和骨質(zhì)疏松患者股骨局部骨微結(jié)構(gòu)比較

于“痹證、骨痹、骨痿及骨枯”范疇。因此，中醫(yī)理論認(rèn)為骨質(zhì)疏松癥是腎、脾、肝、氣、血瘀病變引起的年老體弱、腎氣不足、腎陽虛和腎陰虛、筋骨失養(yǎng)、經(jīng)絡(luò)不通、氣血瘀阻，屬本虛標(biāo)實(shí)之疾[4]。1.2.2 骨質(zhì)疏松現(xiàn)代臨床研究的發(fā)病機(jī)制“中華醫(yī)學(xué)會(huì)骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會(huì)”發(fā)表頒布的最新《原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南》（2017）該指南詳細(xì)記錄了骨質(zhì)疏松的定義、臨床表現(xiàn)、風(fēng)險(xiǎn)因素、診斷與鑒別以及預(yù)防與治療等詳細(xì)內(nèi)容。指南中明確闡述了原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制，見圖 2。遺傳因素和環(huán)境因素是引起老年性骨質(zhì)疏癥的主要因素，隨著年齡的增大，尤其是女性體內(nèi)雌激素代謝減少，卵巢功能減退，機(jī)體對鈣的吸收內(nèi)類減弱，從而引起成骨細(xì)胞凋亡，增殖分化能力減弱，而破骨細(xì)胞的分化增殖加強(qiáng)，引起了大量成骨細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致骨量大量流失，骨密度減小，骨脆性增強(qiáng)。當(dāng)體內(nèi)骨吸收作用強(qiáng)于骨代謝作用時(shí)，此時(shí)骨代謝平衡失調(diào)，引起骨質(zhì)疏松病變。

20min 249.8 2202.2 1126.2 118.730min 8.77 1995.8 587.8 92.240min 8.75 1834.9 311.4 84.250min 8.75 1647.1 201.7 76.41h 8.71 586.1 126.5 45.32h 8.68 246.9 46.8 10.63h 8.56 245.8 46.6 10.44h 8.56 245.6 46.6 10.45h 8.56 245.6 46.5 10.4RPH 的紫外最大吸收波長 500nm-200nm 區(qū)間進(jìn)行全波長掃描，由圖 1.1 圖譜可知，ORPH 在 A 峰，其吸收波長約為 280-290nm，OD 值為 0.732，初步判斷 ORPH 具有吸收波長。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]林蛙油蛋白對骨質(zhì)疏松大鼠成骨分化的影響研究[J]. 李曉華,隋欣,蘭興成,楊擎,隋清淳,楊鵬,李銀清,石曉征,李娜,曲曉波,俞之胤,Han Dong,Yu peng.  中藥藥理與臨床. 2018(02)
[2]原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥診療指南（2017）[J]. Chinese Society of Osteoporosis and Bone Mineral Research;.  中國全科醫(yī)學(xué). 2017(32)
[3]基于質(zhì)譜的定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)發(fā)展現(xiàn)狀[J]. 牟永瑩,顧培明,馬博,閆文秀,王道平,潘映紅.  生物技術(shù)通報(bào). 2017(09)
[4]哈蟆油通過激活PI3K/Akt/NF-κB途徑保護(hù)氧化應(yīng)激損傷的大鼠卵巢顆粒細(xì)胞[J]. 零小妹,張緒慧,楊晶晶,吳新榮,梁磊.  天然產(chǎn)物研究與開發(fā). 2017(06)
[5]哈蟆油蛋白酶解物對小鼠微核、精子畸形及Ames試驗(yàn)的研究[J]. 潘黛安,張鶴,魏星華,邊帥,王秋,齊濱,趙雨,趙大慶.  時(shí)珍國醫(yī)國藥. 2016(06)
[6]林蛙油化學(xué)成分及藥理作用研究[J]. 王丹彤,王丹輝.  長春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2015(06)
[7]MicroRNA-33在過氧化氫誘導(dǎo)NIH/3T3細(xì)胞衰老模型中的表達(dá)及作用[J]. 徐舜,黃海姣,李南紅,張兵,賈宇斌,楊宇坤,崔紅晶,劉新光.  牡丹江醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2015(05)
[8]補(bǔ)中益氣湯治療脾氣虛證大鼠肌無力的機(jī)制研究[J]. 周昕欣,王彩霞.  中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志. 2015(03)
[9]林蛙卵多糖的提取工藝及其抗氧化作用研究[J]. 陳大勇,楊靖,李碩,鄭毅男,衛(wèi)功慶.  西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2013(12)
[10]中醫(yī)理論對骨質(zhì)疏松癥發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識[J]. 王少君,李艷,劉紅,劉振海.  世界中醫(yī)藥. 2013(09)

博士論文
[1]哈蟆油化學(xué)成分的研究[D]. 徐陽.吉林大學(xué) 2016
[2]哈蟆油延緩衰老作用及機(jī)制研究[D]. 姚暉.南方醫(yī)科大學(xué) 2010

碩士論文
[1]老年男性骨質(zhì)疏松癥患者腎陽虛證與總Ⅰ型膠原延長肽和骨鈣素的關(guān)系[D]. 張玉英.山東中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[2]林蛙油抗氧化肽的制備及其抗氧化活性的研究[D]. 藍(lán)晶晶.北京林業(yè)大學(xué) 2012
[3]絕經(jīng)后婦女血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1與骨密度的關(guān)系[D]. 秦健.青島大學(xué) 2008
[4]哈蟆油中鎮(zhèn)咳活性成分的化學(xué)合成及活性研究[D]. 王哲.長春中醫(yī)藥大學(xué) 2007



本文編號：3120961