目的:廣地龍為我國常用的動物類藥材,在我國最早的中藥學著作《神農本草經》中就已收載,其藥用歷史十分悠久,具有清熱抗炎、抗驚厥、溶栓、平喘、利尿等功效,廣泛應用于哮喘等呼吸道疾病的治療。雖然廣地龍有良好的平喘功效,但關于其抗哮喘分子機制的報道甚少。因此,本研究擬構建原代大鼠氣道平滑肌細胞（ASMC）的增殖模型,通過研究廣地龍對ASMC增殖的影響作用,從細胞學和分子生物學水平探索廣地龍治療哮喘中氣道重塑的作用靶點和作用途徑,為廣地龍開發(fā)新的治療靶點和臨床合理應用提供相關的理論基礎和實驗依據。方法:培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細胞（ASMC）的實驗中,在無菌條件下從SPF級雄性SD大鼠分離出氣管,并小心翼翼剝除結締組織和脂肪,采用組織塊法培養(yǎng)原代大鼠氣道平滑肌細胞（ASMC）,根據成纖維細胞和平滑肌細胞的貼壁時間不同,采用差速法純化,并以熒光免疫反應鑒定其純度。構建大鼠氣道平滑肌細胞（ASMC）增殖模型的實驗中,取第3～6代的ASMC,以組胺（Hist）作為大鼠氣道平滑肌細胞（ASMC）增殖模型的誘導劑,選用四甲基偶氮唑鹽法（MTT）考察Hist誘導ASMC增殖的成模濃度與時間范圍。探索廣地龍對平... 

【文章來源】：廣州中醫(yī)藥大學廣東省

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．?１?ＴＧＦ－?Ｐ?／ｓｍａｄｓ信號途徑機制示意圖??１．１．２．?２ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依賴通路（圖１．２）：?ＮＦ－ｋＢ－ＴＧＦ－Ｐ依賴通路是氣道重??塑的重要通路之一

纖維細胞轉變，導致氣道重塑。??圖１．２?ＮＦ－?ｋ?Ｂ信號通路機制７Ｆ意圖??１．１．２．３?ＭＡＰＫｓ通路（圖１．３）：?ＭＡＰＫｓ通路主要是通過促進ＡＳＭＣ異常增殖，且??釋放多種活性成分，從而參與氣道重塑的發(fā)生和發(fā)展。ＭＡＰＫ是一個絲氨酸／蘇氨酸激??酶家族，主要將細胞外刺激信號從細胞膜表面?zhèn)鲗е良毎藘�，有三個部分構成：ＥＲＫ、??ｐ３８和ＪＮＫ。ＥＲＫ部分是細胞增殖、分化、存活的關鍵的調控信號；ｐ３８和ＪＮＫ參與細??胞應激和凋亡的調節(jié)。冃前研究認為，主要誘導ＡＳＭＣ進行分裂的因子包括：①生長??因子：轉化生長因子－３（ＴＧＦ－?Ｐ?）、表皮生長因子（ＥＧＦ）、血小板衍生生長因子（ＰＤＧＦ）、??胰島素樣生長因子（ＩＧＦ）、成纖維細胞生長因子；②炎癥介質：內皮素－１?（ＥＴ－?１）、??白三烯Ｄ?４?（ＬＴＩ）?４）、血栓素Ａ?２?（ＴＸＡ?２）；③細胞因子：ＩＬ＿?１１和ＩＬ－?６；④酶：??ａ－凝血酶、溶酶體水解酶等。不同的促有絲分裂因子可與不同的受體結合發(fā)揮傳遞??信號的作用ｗ，生長因子是通過催化蛋白質酪氨酸殘基磷酸化而誘導ＡＳＭＣ的有絲分??裂，一些炎癥介質與Ｇ－蛋白耦聯(lián)型受體（ＧＰＣＲ）相結合發(fā)揮作用，而細胞因子是經細??胞表面與Ｓｒｃ相耦聯(lián)的糖蛋白受體傳遞信號，不Ｎ途徑傳遞的信號都是以ｐ２１ｒａＳ?（?—??鐘單體ＧＴＰ結合蛋白）為聚合點？，然后ｐ２１ｍＳ分別與下游的ｒａｆ－?１或磷脂酰肌??５??

，＿用，可改善組胺引發(fā)的豚鼠哮喘病情和舒張痙攣的離體氣道組織，而對Ａｃｈ所誘導??鼠哮喘無療效［４°］。??１．２．?１．３纖溶作用??上皮下纖維化作為哮喘氣道重塑的一個重要的病理生理學變化，其形成與細胞外??質（ＥＣＭ）的生成，堆積和降解有關。而纖溶酶和基質金屬蛋白酶（ＭＭＰｓ）是參與??控細胞外基質的沉淀和水解的關鍵性蛋白酶。首先，在麗Ｐ依賴型膠原水解之前，??溶酶從ＥＣＭ中降解糖蛋白；其次，纖溶酶可直接活化ＭＭＰｓ促進ＥＣＭ的降解［４１］；最??，纖溶酶也可以通過拮抗匪Ｐ抑制物減少ＥＣＭ的沉淀。??研宄表明，地龍具有活化纖溶酶作用和直接降解纖維蛋白的纖溶酶樣作用，可使??血液中優(yōu)球蛋白的纖溶活性增加和降解時間縮短。Ｍｉｈａｒａ是第一個發(fā)現(xiàn)地龍水提物能??揮直接降解纖維蛋白和活化纖溶酶原的作用，并將其稱為蚓激酶［４２］，廣地龍因其較??的纖溶作用而起到控制或扭轉氣道重塑的上皮下纖維化。??為了便于了解近年來地龍藥理作用，本文利用簡化過后的圖表將其藥理作用進行??了總結和梳理，詳見下圖（圖１．４）。??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]丹參酮ⅡA對大鼠肺纖維化細胞TGF-β1/Smads信號通路的影響[J]. 邵笑,祝驥,趙峻峰,許穎齡,張穎穎,楊建清,盧德趙.  浙江中西醫(yī)結合雜志. 2016(05)
[2]補陽還五湯大鼠含藥血清對肺成纖維細胞TGF-β1/Smad/ERK信號通路的影響[J]. 李水芹,李學君,王飛,鐘振東.  遼寧中醫(yī)雜志. 2015(12)
[3]平喘Ⅰ號對哮喘鼠氣道重塑ERK信號轉導的干預[J]. 楊季國,馬慧娟,徐纓,沈聰玲,李鵬飛,徐王燕,申琳雅.  中華中醫(yī)藥雜志. 2014(11)
[4]支氣管哮喘氣道重塑的研究認識[J]. 蘭永懷,周銅,楊繹原,李艫,文新強,唐映利.  中國臨床研究. 2014(06)
[5]補陽還五湯對肺纖維化大鼠肺組織TGF-β1/Smad3表達的影響[J]. 楊晗,王飛,王全林,鐘振東,李斌,楊昆.  中國實驗方劑學雜志. 2013(24)
[6]哮喘氣道重塑大鼠氣道上皮細胞及線粒體超微結構變化[J]. 李淼,尚云曉.  中國組織化學與細胞化學雜志. 2013(01)
[7]祛風宣痹方對哮喘豚鼠p38 MAPK信號通路的影響[J]. 史鎖芳,劉麗,黃輝,沈偉.  中華中醫(yī)藥雜志. 2012(09)
[8]氣道平滑肌細胞作為免疫調節(jié)細胞與支氣管哮喘炎癥的關系[J]. 張貞貞,莫碧文.  中華哮喘雜志(電子版). 2012(01)
[9]阿奇霉素對大鼠氣道平滑肌細胞瘦素和白介素-8、腫瘤壞死因子-α表達的影響[J]. 張文輝,嵇桂娟,朱述陽,段存玲,閆明華.  實用醫(yī)學雜志. 2011(23)
[10]參環(huán)毛蚓細胞原代培養(yǎng)滅菌方法的研究[J]. 林小樺,李薇,侯雪芹,李巧容,韋健紅,李維.  廣州中醫(yī)藥大學學報. 2011(03)

碩士論文
[1]組胺對哮喘大鼠氣道平滑肌細胞增殖及ERKmRNA、CyclinD1mRNA表達的影響[D]. 柴景偉.山西醫(yī)科大學 2011
[2]ERK信號通路在組胺誘導的大鼠氣道平滑肌細胞增殖中的調控作用[D]. 黃磊.安徽醫(yī)科大學 2009



本文編號：3120836