研究目的:丹參具有益氣化瘀之功,丹參制劑配合放化療在腫瘤治療中具有良好的臨床療效,但具體機制尚不明確,因此本文通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實驗的方法來闡明丹參有效成分丹參酮Ⅰ對宮頸癌的作用及其機制。研究內(nèi)容與方法:本文分為兩部分,第一部分主要是通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測丹參有效成分丹參酮Ⅰ對宮頸癌的作用靶點與分子機制。主要方法為:采用多個數(shù)據(jù)庫聯(lián)合檢索及文獻挖掘,其中借助TCMSP數(shù)據(jù)庫查找丹參有效成分,結(jié)合類藥五原則,采用ADME方法篩選丹參主要活性成分,通過CTD、STITCH數(shù)據(jù)庫獲取與丹參酮I相關(guān)靶點及宮頸癌疾病靶點,篩選兩者的交集靶點:通過DAVID數(shù)據(jù)庫進行基因注釋,分析潛在靶點的基因功能及信號通路。采用STRING平臺分析并篩選蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò),利用Cytoscape軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),運用cytoHubba的MCC算法,篩選關(guān)鍵基因靶點,建立關(guān)鍵基因靶點的網(wǎng)絡(luò)模型,從分子水平預(yù)測丹參酮Ⅰ對宮頸癌的作用機制。第二部分主要是通過實驗驗證丹參酮Ⅰ對宮頸癌增殖遷移的作用,主要方法為:通過CCK-8法、細胞計數(shù)觀察丹參酮Ⅰ對宮頸癌Hela細胞增殖和數(shù)量的影響,通過集落實驗觀察丹參酮Ⅰ對宮頸癌H... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３丹參酮Ｉ作用于宮頸癌潛在靶點的ＧＯ富集通路注釋（Ａ）生物過程（Ｂ）細胞組分（Ｃ）分子功能??Ｆｉｇ．?３Ｅｎｒｉｃｈｅｄ?ｇｅｎｅ?ｏｎｔｏｌｏｇｙ?ｔｅｒｍｓ?ｆｏｒ?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ?Ａ）?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?（Ｂ）?ａｎｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ??

??為了驗證上述結(jié)果進一步采用細胞計數(shù)方法檢測不同濃度的丹參酮Ｉ對細胞數(shù)量的影??響（圖１Ｂ），結(jié)果顯示１２．５－ｌＯＯｐＭ的丹參酮Ｉ在作用Ｈｅｌａ細胞２４ｈ和４８ｈ后均能顯著抑??制Ｈｅｌａ細胞的數(shù)量，且呈濃度和時間依賴性，即藥物濃度越高抑制作用越強，藥物作用時??間越長，抑制作用越明顯。??集落實驗檢測活細胞的增殖能力，避免了在生長曲線繪制時將死細胞或不能再分裂細??胞計數(shù)在內(nèi)而導(dǎo)致的實驗結(jié)果誤差。前期丹參酮Ｉ對細胞增殖和數(shù)量均有顯著抑制作用，??因此，我們進一步觀察了其對宮頸癌集落形成能力的影響，結(jié)果顯示（圖１Ｃ），不同濃度??的丹參酮Ｉ?（１２．５－１００｜ｕＭ）均能夠顯著抑制宮頸癌Ｈｅｌａ細胞集落形成。溶劑對照組中細胞??集落形成，細胞團塊較大，１２．５ｐＭ的丹參酮Ｉ處理后的Ｈｅｌａ細胞有個別團塊形成，但團??塊個體較小，密度低。２５－１００｜ａＭ的丹參酮Ｉ作用后，細胞不形成團塊，僅見散在的單個細??胞。??Ａ?Ｂ??４＊??２〇］?－２４ｈ?＿?？?Ｗ??１５?．?□妙之３＿?＂＂?１２５＾??ｓ

的形成；第二步：細胞極性的建立；第三步：細胞的粘附；第四步：細胞后部的縮回［１５］。??因此，細胞粘附能力的改變影響著細胞遷移的進程。我們通過粘附實驗檢測不同濃度的丹??參酮Ｉ對Ｈｅｌａ細胞粘附的影響（圖２Ａ）。丹參酮Ｉ作用Ｈｅｌａ細胞２４ｈ后，對照組細胞粘附??能力強，細胞密度大，隨著丹參酮Ｉ藥物濃度的升高，Ｈｅｌａ細胞的粘附能力逐漸下降，細??胞數(shù)量明顯減少；與對照組相比，１２．５－１０（Ｈ；Ｍ的丹參酮對Ｈｅｌａ細胞的粘附作用依次為６３％，??５３％，?４０°／。，１５％，結(jié)果提示藥物濃度越高抑制粘附的作用越強（圖２Ｂ）。??Ａ??⑴薇私滅公／！知邊為１屬＿??０?ｆｉ?ｍ?１２．５?（ｉｍ?２５ｆｉ?ｍ?５０ｆｉ?ｍ?１００｜ｉ?ｍ??１５０－．??Ｂ?ｇ??ｏ??＾?１００－??ｉ５°＿??Ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ?Ｉ?（ｐＭ）??圖２?Ａ）通過粘附實驗檢測丹參酮Ｉ對Ｈｅｌａ細胞粘附能力的影響。Ｂ）丹參酮Ｉ對Ｈｅｌａ細胞的粘附抑制率。??（又士ＳＤ，?ｎ＝３）??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]活血化瘀中藥抗腫瘤作用機制研究進展[J]. 蔡利,徐力.  名醫(yī). 2019(03)
[2]丹參酮ⅡA藥理作用研究進展[J]. 張媛,毛浩萍,樊官偉.  天津中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2019(01)
[3]PI3K/Akt/mTOR通路抑制劑提高宮頸癌對放療敏感性的研究[J]. 林勤,劉璐,吳韞韜.  世界臨床藥物. 2019(01)
[4]腫瘤相關(guān)巨噬細胞促進宮頸癌侵襲轉(zhuǎn)移的機制研究[J]. 陳曉靜,王薇,周琛斐,魏文斐,吳湘光,嚴瑞明,張延梅,梁羅嬌,吳砂,梁莉,鐘梅,余艷紅.  腫瘤防治研究. 2019(03)
[5]活血化瘀藥在抗腫瘤及轉(zhuǎn)移中的運用思考[J]. 唐德才.  南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報. 2019(01)
[6]TLR4/NF-κB表達升高促進宮頸癌增殖和轉(zhuǎn)移的作用及機制[J]. 蔡靜,張丹,張燕.  中國生育健康雜志. 2019(01)
[7]宮頸癌篩查方法的現(xiàn)狀與研究進展[J]. 陳靜.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2019(01)
[8]宮頸癌疫苗的研究進展[J]. 丘金浪,黃小燕,高乾瑜,李玉花.  世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘. 2018(A2)
[9]中醫(yī)藥治療宮頸人乳頭瘤病毒感染的臨床研究進展[J]. 覃曉洵,錢麟.  河北中醫(yī). 2018(10)
[10]人乳頭瘤病毒分型與血清糖類抗原125、癌胚抗原、鱗狀細胞相關(guān)抗原在不同程度宮頸病變及宮頸癌診斷中的價值[J]. 歐陽強.  中國婦幼保健. 2018(21)

博士論文
[1]遷移體的發(fā)現(xiàn)及其分子機制研究[D]. 馬亮.清華大學(xué) 2017
[2]第一部分 NOK癌基因的糖代謝調(diào)控機制 第二部分 干擾素α誘導(dǎo)HeLa細胞凋亡的分子機制[D]. 石煒業(yè).北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 2017
[3]基于Wnt及NF-κB信號通路探討補腎健脾活血湯對糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠作用機制的研究[D]. 許建國.山東中醫(yī)藥大學(xué) 2015
[4]丹參酮Ⅰ對人乳腺癌細胞的抑制作用及對PI3K/Akt/mT0R信號通路的影響[D]. 王麗.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2014
[5]基于中藥資源的計算機輔助藥物分子設(shè)計[D]. 田盛.蘇州大學(xué) 2014
[6]丹酚酸A抗血小板及抗血栓作用的研究[D]. 范華英.吉林大學(xué) 2012
[7]靶向HPV16 E6的siRNA治療宮頸癌的實驗研究[D]. 王曉春.中南大學(xué) 2007

碩士論文
[1]�；撬釋m頸癌細胞自噬與凋亡的影響[D]. 阮雯靜.南昌大學(xué) 2017
[2]丹參酮Ⅰ通過誘導(dǎo)細胞凋亡和自噬抑制腫瘤細胞增殖的體外研究[D]. 張英.中國中醫(yī)科學(xué)院 2017
[3]金雀異黃素抑制宮頸癌Hela細胞增殖遷移作用及其機制的研究[D]. 王娟.揚州大學(xué) 2017
[4]FGFR3，TP53和XRCC1基因單核苷酸多態(tài)性與宮頸癌遺傳風(fēng)險的關(guān)聯(lián)分析[D]. 周云飛.重慶醫(yī)科大學(xué) 2015
[5]丹參酮IIA抑制前列腺癌細胞株生長和誘導(dǎo)凋亡的試驗研究[D]. 夏崢嶸.復(fù)旦大學(xué) 2008
[6]惡性腫瘤患者糖代謝紊亂的臨床分析[D]. 詹雅詩.暨南大學(xué) 2008



本文編號：3105795