研究目的:丹參具有益氣化瘀之功,丹參制劑配合放化療在腫瘤治療中具有良好的臨床療效,但具體機(jī)制尚不明確,因此本文通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和實(shí)驗(yàn)的方法來(lái)闡明丹參有效成分丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌的作用及其機(jī)制。研究?jī)?nèi)容與方法:本文分為兩部分,第一部分主要是通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)丹參有效成分丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌的作用靶點(diǎn)與分子機(jī)制。主要方法為:采用多個(gè)數(shù)據(jù)庫(kù)聯(lián)合檢索及文獻(xiàn)挖掘,其中借助TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)查找丹參有效成分,結(jié)合類藥五原則,采用ADME方法篩選丹參主要活性成分,通過(guò)CTD、STITCH數(shù)據(jù)庫(kù)獲取與丹參酮I相關(guān)靶點(diǎn)及宮頸癌疾病靶點(diǎn),篩選兩者的交集靶點(diǎn):通過(guò)DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行基因注釋,分析潛在靶點(diǎn)的基因功能及信號(hào)通路。采用STRING平臺(tái)分析并篩選蛋白-蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò),利用Cytoscape軟件構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò),運(yùn)用cytoHubba的MCC算法,篩選關(guān)鍵基因靶點(diǎn),建立關(guān)鍵基因靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)模型,從分子水平預(yù)測(cè)丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌的作用機(jī)制。第二部分主要是通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌增殖遷移的作用,主要方法為:通過(guò)CCK-8法、細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞增殖和數(shù)量的影響,通過(guò)集落實(shí)驗(yàn)觀察丹參酮Ⅰ對(duì)宮頸癌H... 

【文章來(lái)源】：揚(yáng)州大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：68 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖３丹參酮Ｉ作用于宮頸癌潛在靶點(diǎn)的ＧＯ富集通路注釋（Ａ）生物過(guò)程（Ｂ）細(xì)胞組分（Ｃ）分子功能??Ｆｉｇ．?３Ｅｎｒｉｃｈｅｄ?ｇｅｎｅ?ｏｎｔｏｌｏｇｙ?ｔｅｒｍｓ?ｆｏｒ?ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ?ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ?Ａ）?ｃｅｌｌｕｌａｒ?ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ?（Ｂ）?ａｎｄ?ｍｏｌｅｃｕｌａｒ??

??為了驗(yàn)證上述結(jié)果進(jìn)一步采用細(xì)胞計(jì)數(shù)方法檢測(cè)不同濃度的丹參酮Ｉ對(duì)細(xì)胞數(shù)量的影??響（圖１Ｂ），結(jié)果顯示１２．５－ｌＯＯｐＭ的丹參酮Ｉ在作用Ｈｅｌａ細(xì)胞２４ｈ和４８ｈ后均能顯著抑??制Ｈｅｌａ細(xì)胞的數(shù)量，且呈濃度和時(shí)間依賴性，即藥物濃度越高抑制作用越強(qiáng)，藥物作用時(shí)??間越長(zhǎng)，抑制作用越明顯。??集落實(shí)驗(yàn)檢測(cè)活細(xì)胞的增殖能力，避免了在生長(zhǎng)曲線繪制時(shí)將死細(xì)胞或不能再分裂細(xì)??胞計(jì)數(shù)在內(nèi)而導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差。前期丹參酮Ｉ對(duì)細(xì)胞增殖和數(shù)量均有顯著抑制作用，??因此，我們進(jìn)一步觀察了其對(duì)宮頸癌集落形成能力的影響，結(jié)果顯示（圖１Ｃ），不同濃度??的丹參酮Ｉ?（１２．５－１００｜ｕＭ）均能夠顯著抑制宮頸癌Ｈｅｌａ細(xì)胞集落形成。溶劑對(duì)照組中細(xì)胞??集落形成，細(xì)胞團(tuán)塊較大，１２．５ｐＭ的丹參酮Ｉ處理后的Ｈｅｌａ細(xì)胞有個(gè)別團(tuán)塊形成，但團(tuán)??塊個(gè)體較小，密度低。２５－１００｜ａＭ的丹參酮Ｉ作用后，細(xì)胞不形成團(tuán)塊，僅見(jiàn)散在的單個(gè)細(xì)??胞。??Ａ?Ｂ??４＊??２〇］?－２４ｈ?＿?？?Ｗ??１５?．?□妙之３＿?＂＂?１２５＾??ｓ

的形成；第二步：細(xì)胞極性的建立；第三步：細(xì)胞的粘附；第四步：細(xì)胞后部的縮回［１５］。??因此，細(xì)胞粘附能力的改變影響著細(xì)胞遷移的進(jìn)程。我們通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度的丹??參酮Ｉ對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞粘附的影響（圖２Ａ）。丹參酮Ｉ作用Ｈｅｌａ細(xì)胞２４ｈ后，對(duì)照組細(xì)胞粘附??能力強(qiáng)，細(xì)胞密度大，隨著丹參酮Ｉ藥物濃度的升高，Ｈｅｌａ細(xì)胞的粘附能力逐漸下降，細(xì)??胞數(shù)量明顯減少；與對(duì)照組相比，１２．５－１０（Ｈ；Ｍ的丹參酮對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞的粘附作用依次為６３％，??５３％，?４０°／。，１５％，結(jié)果提示藥物濃度越高抑制粘附的作用越強(qiáng)（圖２Ｂ）。??Ａ??⑴薇私滅公／！知邊為１屬＿??０?ｆｉ?ｍ?１２．５?（ｉｍ?２５ｆｉ?ｍ?５０ｆｉ?ｍ?１００｜ｉ?ｍ??１５０－．??Ｂ?ｇ??ｏ??＾?１００－??ｉ５°＿??Ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅ?Ｉ?（ｐＭ）??圖２?Ａ）通過(guò)粘附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)丹參酮Ｉ對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞粘附能力的影響。Ｂ）丹參酮Ｉ對(duì)Ｈｅｌａ細(xì)胞的粘附抑制率。??（又士ＳＤ，?ｎ＝３）??

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