發(fā)布時間：2021-03-26 23:16

　　目的研究甘肅野生與栽培烏拉爾甘草內生菌代謝產物的抑菌、抗炎、鎮(zhèn)咳、祛痰作用及有效內生菌代謝產物的相關物質,揭示甘草內生菌代謝產物與宿主植物在藥效及化學成分方面的關聯,為甘草內生菌代謝產物作為微生物資源應用提供依據。方法1.內生菌的分離與鑒定:采用瓊脂法對野生及栽培烏拉爾甘草內生菌分離純化,并對預實驗篩選的20株甘草內生菌進行分子生物學鑒定,內生細菌采用16Sr DNA鑒定,內生真菌采用ITS鑒定。2.抑菌研究:體外抑菌試驗,采用體外定量抑菌方法,以肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為供試菌,檢測甘草內生菌代謝產物的抑菌圈直徑、最小抑菌濃度。體內抑菌試驗,采用小鼠最小致死量（MLD）測定法,將供試菌肺炎鏈球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌分別配成6個濃度梯度的菌懸液,昆明種小鼠3批,每批60只,隨機分為6組,每組小鼠腹腔注射一個濃度的供試菌菌懸液,每只0.5m L,觀察4d內各組小鼠死亡情況,測定供試菌MLD。再采用對各供試菌感染致死小鼠的保護作用試驗方法,昆明種小鼠500只,隨機分為25組,即空白組、模型組、陽性對照組、野生甘草水煎液組、栽培甘草水煎液組、20株甘草內生菌發(fā)酵物組,各組按... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學甘肅省

【文章頁數】：127 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
符號說明
前言
第一章 甘草內生菌的分離與鑒定
    第一節(jié) 甘草內生菌的分離
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 表面消毒
            2.2 甘草內生菌的分離純化
            2.3 甘草內生菌的初步鑒定
        3 結果
            3.1 內生菌的形態(tài)學鑒定、編號
            3.2 內生菌的分離株數
        4 討論
        5 小結
    第二節(jié) 甘草內生菌的鑒定
        1 實驗材料
        2 實驗方法
            2.1 甘草內生菌有效菌株的活化
            2.2 甘草內生菌的形態(tài)學鑒定
            2.3 甘草內生菌的分子生物學鑒定
        3 結果
            3.1 甘草內生菌菌株形態(tài)
            3.2 分子生物學鑒定結果
        4 討論
        5 小結
第二章 甘草內生菌代謝產物抑菌作用研究
    1 實驗材料
    2 實驗方法
        2.1 甘草內生菌發(fā)酵物的體外抑菌試驗
        2.2 甘草內生菌發(fā)酵物體內抑菌試驗
    3 結果
        3.1 體外抑菌
        3.2 體內抑菌試驗
    4 討論
    5 小結
第三章 甘草內生菌代謝產物抗炎作用研究
    第一節(jié) 體外抗炎作用研究
        1 材料
        2 方法
            2.1 細胞培養(yǎng)
            2.2 對RAW264.7 細胞存活率試驗（MTT法）
            2.3 檢測LPS誘導RAW264.7 細胞分泌的NO含量
            2.4 檢測LPS誘導RAW264.7 細胞分泌的IL-1β、PGE2的含量
        3 結果
            3.1 對巨噬細胞RAW264.7 存活率的影響
            3.2 各組藥物對LPS誘導的RAW264.7 分泌炎癥因子的影響
        4 討論
    第二節(jié) 體內抗炎作用研究
        1 材料與儀器
        2 方法
            2.1 甘草內生菌活化
            2.2 藥物制備
            2.3 二甲苯致小鼠耳腫脹試驗
            2.4 冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高試驗
            2.5 對LPS致急性肺炎大鼠的干預作用
        3 結果
            3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
            3.2 對冰醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增高的影響
            3.3 對LPS致急性肺炎大鼠的干預作用
        4 討論
        5 本章小結
第四章 甘草內生菌代謝產物鎮(zhèn)咳祛痰作用研究
    1 材料與儀器
    2 實驗方法
        2.1 受試物制備
        2.2 小鼠氨水引咳法
        2.3 小鼠SO2引咳法
        2.4 大鼠痰濁阻肺試驗
    3 結果
        3.1 各組藥物對氨水引咳小鼠的影響
2引咳小鼠的影響">        3.2 各組藥物對SO₂引咳小鼠的影響
        3.3 各組藥物對痰濁阻肺模型大鼠的影響
    4 討論
    5 小結
第五章 甘草內生菌代謝產物化學成分的含量測定
    第一節(jié) 總黃酮和總皂苷的含量測定
        1 材料
        2 方法與結果
            2.1 對照品溶液的制備
            2.2 供試品溶液制備
            2.3 UV檢測波長的確定
            2.4 方法學考察
            2.5 不同編號的內生菌發(fā)酵物中總黃酮、總皂苷含量測定結果
        3 討論
    第二節(jié) HPLC測定甘草內生菌代謝產物中甘草酸銨、甘草苷及甘草素的含量
        1 材料
        2 方法與結果
            2.1 色譜條件
            2.2 對照品溶液的制備
            2.3 供試品溶液的制備
            2.4 線性考察
            2.5 精密度試驗
            2.6 重復性試驗
            2.7 穩(wěn)定性試驗
            2.8 加樣回收率試驗
            2.9 含量測定
        3 討論
第六章 全文總結與展望
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
研究成果
致謝



本文編號：3102415