目的:以抑制卵巢癌浸潤轉(zhuǎn)移的RAC1蛋白為潛在靶點,利用分子對接輔助設計軟件,對先導化合物大黃酸的母體結(jié)構(gòu)進行修飾并合成大黃酸衍生物,探討新合成衍生物對卵巢癌SKOV3細胞的生長抑制作用以及靶向調(diào)控機制。方法:1.基于RAC1靶點,利用分子對接軟件,對大黃酸進行結(jié)構(gòu)修飾合成大黃酸衍生物,利用紫外分光光度計、多功能酶標儀測定衍生物的紫外可見光吸收光譜、熒光激發(fā)光譜、熒光發(fā)射光譜,激光共聚焦顯微鏡觀察衍生物在卵巢癌SKOV3細胞內(nèi)的分布,高效液相色譜儀檢測SKOV3細胞對合成衍生物的攝取量。2.采用MTT法檢測衍生物對SKOV3細胞的生長抑制作用,HE染色觀察衍生物4L對SKOV3細胞形態(tài)的影響,利用流式細胞儀檢測衍生物4L對SKOV3細胞誘導凋亡情況,劃痕實驗檢測衍生物對SKOV3細胞遷移能力的影響,Transwell實驗檢測衍生物對SKOV3細胞侵襲能力的影響。3.Western blot法檢測衍生物作用于SKOV3細胞后RAC1的表達情況的變化,根據(jù)熒光素酶報告基因系統(tǒng)原理構(gòu)建含RAC1基因啟動子和熒光素酶報告基因的慢病毒載體,轉(zhuǎn)染SKOV3細胞株后經(jīng)篩選獲得SKOV3-RAC1-L... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－１．大黃酸、化合物Ｘ和４Ｌ的分子結(jié)構(gòu)，Ａ．大黃酸，Ｂ．化合物Ｘ，?Ｃ．大黃酸衍生物４Ｌ??

波長為２６１ｎｍ和４３１ｎｍ。結(jié)構(gòu)改造后大黃酸紫外區(qū)的吸收峰未發(fā)??生明顯改變，可見光區(qū)的吸收峰發(fā)生明顯藍移，結(jié)構(gòu)改造后的衍生物４Ｌ吸??收峰分別為２６２ｎｍ和３８６ｎｍ，如圖１－３。??０？７００?｜?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ?Ｉ??０．６３０?＾６１００?－??０．５６０?■?ｉ?－??０．４９０?－?Ｉ?＼?？??０．４２０?■?＼?－??Ｒｈｅｉｎ?｜?〇．３５〇?■?＼?４３ｉ．〇〇?■??０．２８０?？?？??０?２１０?ｉ?Ａ??０．１４０?＼?＼?３２７．ｆｆｉ８．００?／?＼?－??ｙ?＼?Ｉ?Ｉ?Ｚ?＼?５３１．００??０．０７０?－?１?１?＼?－?－??〇．〇〇〇?｜?，?，?，?，?，?■——■?■■?■??２４９．００?２８６．１０?３２３．２０?３６０．３０?３９７．４０?４３４．５０?４７１．６０?５０８．７０?５４５．８０?５８２．９０?６２０．００??波長“）??０．７００??１?１?■???１?１?１?１?１?１?＇?■?■?ｉ???０．６３０?■?？??２６２．００??０．５６０?■?｜?■??０．４９０?？?Ａ?．??＼??０．４２０?■?Ｉ?＼?？??４Ｌ?Ｉ?０．３５０?？?Ｉ?＼?．??０．２８０?■?＼?■??＼?３８６．００??０．２１０?■?＼?｜?？??０．１４０＾°?＼?ｎｎ?＾一＼?４２３．００?？??Ｏ．ＯＴＯ?＇Ｖｊ：００—義?■?■??〇■〇〇〇?ｉ?７￣?，?

２０１８屆碩士畢業(yè)論文??３．?５大黃酸衍生物４Ｌ在ＳＫ０Ｖ３細胞的藥物分布??通過激光共聚焦觀察衍生物４Ｌ的藥物分布，結(jié)果見圖１－５，紅色的標記??的是細胞膜，藍色的是細胞核，衍生物４Ｌ的激發(fā)波長為４７〇ｎｍ，發(fā)射波長為??５４０ｎｍ，因此在４７０ｍｎ的激發(fā)光激發(fā)下可以發(fā)出綠色的熒光，發(fā)現(xiàn)藥物除了??在細胞的邊緣聚集，在細胞內(nèi)也有明顯的聚集，說明衍生物４Ｌ不僅結(jié)合細??胞膜，還能進入細胞內(nèi)，進入細胞后的藥物主要分布在細胞質(zhì)中，進入細??胞核的較少。??■■??漏邐??圖１－５．４Ｌ在ＳＫ０Ｖ３細胞內(nèi)的分布（６００Ｘ），Ａ．紅色為用ｄｉｌ染的細胞膜，Ｂ．藍色為用ｈｏｅｃｈｅｓｔ染的細胞??核，Ｃ．綠色為被激發(fā)光激發(fā)的４Ｌ，?Ｄ．合并圖??Ｆｉｇｌ－５．

【參考文獻】：
期刊論文
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[2]大黃酸對乳腺癌腫瘤細胞HER-2蛋白表達的影響研究[J]. 錢文斌.  中華中醫(yī)藥學刊. 2015(01)
[3]抗癌新藥乙雙嗎啉（AT-1727）與乙亞胺、丙亞胺的作用比較[J]. 張覃沐,陳正玉,林晨.  河南醫(yī)學院學報. 1980(03)
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碩士論文
[1]大黃酸衍生物RH-01的抑制骨肉瘤生長作用及其作用機制研究[D]. 萬宗明.河北醫(yī)科大學 2006



本文編號：3096408