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基于Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路探討芪藤消濁顆粒治療慢性腎炎的機(jī)制

發(fā)布時(shí)間:2021-03-04 14:51
  目的芪藤消濁顆粒是國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)曹恩澤根據(jù)慢性腎小球腎炎(CGN)“脾虛、濕停、血瘀”的基本病機(jī),提出“健脾、行水、化瘀”的治法,創(chuàng)制的特色中藥制劑,臨床主治CGN療效確切,但其具體的分子學(xué)機(jī)制尚不清楚。本研究旨在研究芪藤消濁顆粒對(duì)Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用,探討芪藤消濁顆粒防治CGN的潛在分子學(xué)機(jī)制。方法1芪藤消濁顆粒對(duì)ADR誘導(dǎo)的CGN大鼠Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用采用尾靜脈注射阿霉素(ADR)復(fù)制CGN大鼠模型,取造模成功大鼠分為模型組、芪藤消濁顆粒不同劑量組(21.6、10.8、5.4 g/kg)組和黃葵膠囊(1.0 g/kg)組,每組10只,另取10只正常大鼠作為對(duì)照組。除模型組外,其余各組給藥30天后,HE染色觀察C GN大鼠腎小球病變情況,測(cè)定24h尿蛋白、N-乙酰氨基糖苷酶(NAG)含量和血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胱抑素(Cys-c)和視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)的含量,RT-q PCR檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2和c-Fos m RNA表達(dá)情況,免疫組化法和Western blot(WB)法檢測(cè)p-Syk... 

【文章來(lái)源】:安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省

【文章頁(yè)數(shù)】:82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】:碩士

【文章目錄】:
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞(Abbreviation)
前言
實(shí)驗(yàn)一 芪藤消濁顆粒對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的慢性腎小球腎炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        1.3 試劑
        1.4 儀器
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 慢性腎小球腎炎動(dòng)物模型的建立及給藥方案
        2.2 大鼠的一般形態(tài)學(xué)觀察
        2.3 大鼠的體質(zhì)量檢測(cè)
        2.4 大鼠 24 h尿蛋白含量和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活力的測(cè)定
        2.5 大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、胱抑素(Cys-c)含量測(cè)定
        2.6 大鼠腎臟指數(shù)的測(cè)定
        2.7 大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)觀察
        2.8 免疫組化法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
        2.9 RT-qPCR檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
        2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠行為狀態(tài)的影響
        4.2 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠體質(zhì)量的影響
        4.3 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠 24h尿蛋白和NAG的影響
        4.4 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠BUN、Scr、Cys-c、RBP的影響
        4.5 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠臟器指數(shù)的影響
        4.6 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)的影響
        4.7 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
        4.8 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.9 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)MEK1/2 mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
        4.10 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
        4.11 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
    5 討論
        5.1 動(dòng)物模型的選擇依據(jù)
        5.2 腎功能指標(biāo)與CGN
        5.3 CGN與Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路
實(shí)驗(yàn)二 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞中Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
    1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
        1.3 細(xì)胞株
        1.4 試劑
        1.5 儀器
        1.6 溶液配制
    2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1 芪藤消濁顆粒含藥血清的制備
        2.2 腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3 MTT法篩選芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間
        2.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)
        2.5 RT-qPCR檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
        2.6 WB檢測(cè)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
    3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間的篩選
        4.2 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
        4.3 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
        4.4 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中MEK1/2mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
        4.5 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中ERK1/2mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
        4.6 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
    5 討論
        5.1 血清藥理學(xué)
        5.2 芪藤消濁顆粒對(duì)GMCs增殖的影響
        5.3 芪藤消濁顆粒對(duì)Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝


【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
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本文編號(hào):3063416

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