基于Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路探討芪藤消濁顆粒治療慢性腎炎的機(jī)制
發(fā)布時(shí)間:2021-03-04 14:51
目的芪藤消濁顆粒是國(guó)家級(jí)名老中醫(yī)曹恩澤根據(jù)慢性腎小球腎炎(CGN)“脾虛、濕停、血瘀”的基本病機(jī),提出“健脾、行水、化瘀”的治法,創(chuàng)制的特色中藥制劑,臨床主治CGN療效確切,但其具體的分子學(xué)機(jī)制尚不清楚。本研究旨在研究芪藤消濁顆粒對(duì)Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用,探討芪藤消濁顆粒防治CGN的潛在分子學(xué)機(jī)制。方法1芪藤消濁顆粒對(duì)ADR誘導(dǎo)的CGN大鼠Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用采用尾靜脈注射阿霉素(ADR)復(fù)制CGN大鼠模型,取造模成功大鼠分為模型組、芪藤消濁顆粒不同劑量組(21.6、10.8、5.4 g/kg)組和黃葵膠囊(1.0 g/kg)組,每組10只,另取10只正常大鼠作為對(duì)照組。除模型組外,其余各組給藥30天后,HE染色觀察C GN大鼠腎小球病變情況,測(cè)定24h尿蛋白、N-乙酰氨基糖苷酶(NAG)含量和血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、胱抑素(Cys-c)和視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)的含量,RT-q PCR檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2和c-Fos m RNA表達(dá)情況,免疫組化法和Western blot(WB)法檢測(cè)p-Syk...
【文章來(lái)源】:安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省
【文章頁(yè)數(shù)】:82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞(Abbreviation)
前言
實(shí)驗(yàn)一 芪藤消濁顆粒對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的慢性腎小球腎炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
1.3 試劑
1.4 儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 慢性腎小球腎炎動(dòng)物模型的建立及給藥方案
2.2 大鼠的一般形態(tài)學(xué)觀察
2.3 大鼠的體質(zhì)量檢測(cè)
2.4 大鼠 24 h尿蛋白含量和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活力的測(cè)定
2.5 大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、胱抑素(Cys-c)含量測(cè)定
2.6 大鼠腎臟指數(shù)的測(cè)定
2.7 大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)觀察
2.8 免疫組化法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
2.9 RT-qPCR檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果
4.1 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠行為狀態(tài)的影響
4.2 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠體質(zhì)量的影響
4.3 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠 24h尿蛋白和NAG的影響
4.4 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠BUN、Scr、Cys-c、RBP的影響
4.5 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠臟器指數(shù)的影響
4.6 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)的影響
4.7 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
4.8 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
4.9 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)MEK1/2 mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.10 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.11 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
5 討論
5.1 動(dòng)物模型的選擇依據(jù)
5.2 腎功能指標(biāo)與CGN
5.3 CGN與Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路
實(shí)驗(yàn)二 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞中Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
1.3 細(xì)胞株
1.4 試劑
1.5 儀器
1.6 溶液配制
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 芪藤消濁顆粒含藥血清的制備
2.2 腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)
2.3 MTT法篩選芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間
2.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)
2.5 RT-qPCR檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
2.6 WB檢測(cè)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果
4.1 芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間的篩選
4.2 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
4.3 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
4.4 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中MEK1/2mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.5 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中ERK1/2mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.6 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
5 討論
5.1 血清藥理學(xué)
5.2 芪藤消濁顆粒對(duì)GMCs增殖的影響
5.3 芪藤消濁顆粒對(duì)Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]腎炎康復(fù)片治療腎小球腎炎的應(yīng)用效果及作用機(jī)制分析[J]. 李君科. 當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2017(03)
[2]黃葵膠囊聯(lián)合纈沙坦膠囊治療慢性腎小球腎炎的療效觀察[J]. 張瑜琪,馮愛(ài)橋. 中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析. 2016(12)
[3]六味地黃湯加減治療慢性腎炎110例臨床療效分析[J]. 張家麗,徐釗熠,馬秀寧. 中國(guó)醫(yī)藥指南. 2016(35)
[4]中藥復(fù)方聯(lián)合西藥治療急性細(xì)菌性痢疾療效及安全性Meta分析[J]. 王一戰(zhàn),蘇芮,韓經(jīng)丹,王玉賢,范吉平. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[5]聯(lián)合檢測(cè)血清CysC和RBP對(duì)腎炎早期診斷價(jià)值[J]. 李卉,吳翠翠. 中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生. 2016(10)
[6]蟲(chóng)類(lèi)藥對(duì)慢性腎小球腎炎治療作用探析[J]. 鞠儉奎,冷玉杰. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(10)
[7]CysC、RBP、BUN和Cr聯(lián)合檢測(cè)早期診斷腎臟疾病的意義研究[J]. 周華強(qiáng),白志楊,伍尚華. 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥. 2016(23)
[8]麻黃連翹赤小豆湯加味治療慢性腎炎的臨床分析[J]. 范志華,王曉婷,崔云,邢曉東. 中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育. 2016(22)
[9]和解少陽(yáng)法聯(lián)合黃芪注射液對(duì)慢性腎小球腎炎蛋白尿及炎癥指標(biāo)的影響研究[J]. 衣芳亮. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(15)
[10]小柴胡湯對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響及臨床應(yīng)用[J]. 張瑩,周小莉. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2016(08)
本文編號(hào):3063416
【文章來(lái)源】:安徽中醫(yī)藥大學(xué)安徽省
【文章頁(yè)數(shù)】:82 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
ABSTRACT
英文縮略詞(Abbreviation)
前言
實(shí)驗(yàn)一 芪藤消濁顆粒對(duì)阿霉素誘導(dǎo)的慢性腎小球腎炎大鼠Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
1.3 試劑
1.4 儀器
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 慢性腎小球腎炎動(dòng)物模型的建立及給藥方案
2.2 大鼠的一般形態(tài)學(xué)觀察
2.3 大鼠的體質(zhì)量檢測(cè)
2.4 大鼠 24 h尿蛋白含量和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活力的測(cè)定
2.5 大鼠血清中尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)、胱抑素(Cys-c)含量測(cè)定
2.6 大鼠腎臟指數(shù)的測(cè)定
2.7 大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)觀察
2.8 免疫組化法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
2.9 RT-qPCR檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
2.10 蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測(cè)CGN大鼠腎皮質(zhì)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果
4.1 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠行為狀態(tài)的影響
4.2 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠體質(zhì)量的影響
4.3 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠 24h尿蛋白和NAG的影響
4.4 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠BUN、Scr、Cys-c、RBP的影響
4.5 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠臟器指數(shù)的影響
4.6 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)病理組織學(xué)的影響
4.7 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
4.8 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
4.9 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)MEK1/2 mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.10 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)ERK1/2 mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.11 芪藤消濁顆粒對(duì)CGN大鼠腎皮質(zhì)c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
5 討論
5.1 動(dòng)物模型的選擇依據(jù)
5.2 腎功能指標(biāo)與CGN
5.3 CGN與Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路
實(shí)驗(yàn)二 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)LPS誘導(dǎo)的腎小球系膜細(xì)胞中Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的調(diào)控作用
1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
1.2 實(shí)驗(yàn)藥物
1.3 細(xì)胞株
1.4 試劑
1.5 儀器
1.6 溶液配制
2 實(shí)驗(yàn)方法
2.1 芪藤消濁顆粒含藥血清的制備
2.2 腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)
2.3 MTT法篩選芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間
2.4 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分組及干預(yù)
2.5 RT-qPCR檢測(cè)Syk、Ras、MEK1/2、ERK1/2、c-Fos mRNA的表達(dá)
2.6 WB檢測(cè)p-Syk、Ras、p-MEK1/2、p-ERK1/2、c-Fos蛋白的表達(dá)
3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
4 結(jié)果
4.1 芪藤消濁顆粒含藥血清最佳濃度和最佳作用時(shí)間的篩選
4.2 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Syk mRNA和p-Syk蛋白表達(dá)的影響
4.3 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中Ras mRNA和蛋白表達(dá)的影響
4.4 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中MEK1/2mRNA和p-MEK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.5 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中ERK1/2mRNA和p-ERK1/2 蛋白表達(dá)的影響
4.6 芪藤消濁顆粒含藥血清對(duì)腎小球系膜細(xì)胞中c-Fos mRNA和蛋白表達(dá)的影響
5 討論
5.1 血清藥理學(xué)
5.2 芪藤消濁顆粒對(duì)GMCs增殖的影響
5.3 芪藤消濁顆粒對(duì)Syk/Ras/c-Fos信號(hào)通路的影響
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
個(gè)人簡(jiǎn)介
致謝
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]腎炎康復(fù)片治療腎小球腎炎的應(yīng)用效果及作用機(jī)制分析[J]. 李君科. 當(dāng)代醫(yī)學(xué). 2017(03)
[2]黃葵膠囊聯(lián)合纈沙坦膠囊治療慢性腎小球腎炎的療效觀察[J]. 張瑜琪,馮愛(ài)橋. 中國(guó)醫(yī)院用藥評(píng)價(jià)與分析. 2016(12)
[3]六味地黃湯加減治療慢性腎炎110例臨床療效分析[J]. 張家麗,徐釗熠,馬秀寧. 中國(guó)醫(yī)藥指南. 2016(35)
[4]中藥復(fù)方聯(lián)合西藥治療急性細(xì)菌性痢疾療效及安全性Meta分析[J]. 王一戰(zhàn),蘇芮,韓經(jīng)丹,王玉賢,范吉平. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2017(01)
[5]聯(lián)合檢測(cè)血清CysC和RBP對(duì)腎炎早期診斷價(jià)值[J]. 李卉,吳翠翠. 中國(guó)城鄉(xiāng)企業(yè)衛(wèi)生. 2016(10)
[6]蟲(chóng)類(lèi)藥對(duì)慢性腎小球腎炎治療作用探析[J]. 鞠儉奎,冷玉杰. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2016(10)
[7]CysC、RBP、BUN和Cr聯(lián)合檢測(cè)早期診斷腎臟疾病的意義研究[J]. 周華強(qiáng),白志楊,伍尚華. 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥. 2016(23)
[8]麻黃連翹赤小豆湯加味治療慢性腎炎的臨床分析[J]. 范志華,王曉婷,崔云,邢曉東. 中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育. 2016(22)
[9]和解少陽(yáng)法聯(lián)合黃芪注射液對(duì)慢性腎小球腎炎蛋白尿及炎癥指標(biāo)的影響研究[J]. 衣芳亮. 現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2016(15)
[10]小柴胡湯對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響及臨床應(yīng)用[J]. 張瑩,周小莉. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào). 2016(08)
本文編號(hào):3063416
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