目的以經(jīng)P物質(zhì)致敏的肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815為模型,檢測(cè)雷公藤紅素對(duì)其細(xì)胞活性的影響,并分析PI3K/AKT/GSK3β通路上關(guān)鍵基因和蛋白表達(dá)量變化,從而為深入揭示雷公藤紅素在抗炎和抗過(guò)敏中的分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法以肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞P815為研究對(duì)象,通過(guò)基于CCK8方法的細(xì)胞活力檢測(cè),確定最佳的P物質(zhì)處理濃度和時(shí)間,構(gòu)建致敏模型;采用同樣的方法,篩選出合適的雷公藤紅素處理濃度和時(shí)間。在此基礎(chǔ)上,檢測(cè)不同濃度和時(shí)間的雷公藤紅素干預(yù)對(duì)致敏細(xì)胞活性的影響。以無(wú)雷公藤處理的P物質(zhì)模型組為對(duì)照,采用qPCR法檢測(cè)雷公藤紅素干預(yù)組中PI3K/AKT/GSK3β信號(hào)通路的主要基因的相對(duì)表達(dá)量;同時(shí)采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)該信號(hào)通路關(guān)鍵蛋白AKT2和GSK3β的表達(dá)。結(jié)果1.對(duì)于單純的P物質(zhì)處理組,在50-150μM處理濃度下,細(xì)胞存活率隨時(shí)間增加而下降;其中100μM處理1h后細(xì)胞的存活率即降低為51.58%,確定為最佳的致敏條件。對(duì)于單純的雷公藤紅素組,當(dāng)干預(yù)濃度超過(guò)2.5μM、時(shí)間超過(guò)1h后,細(xì)胞存活率明顯隨濃度增加和/或時(shí)間延長(zhǎng)而降低;而濃度在2μM、時(shí)間在1h內(nèi),細(xì)胞存活率未受明顯影響（P>... 

【文章來(lái)源】：福建中醫(yī)藥大學(xué)福建省

【文章頁(yè)數(shù)】：44 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

雷公藤紅素的來(lái)源與結(jié)構(gòu)式

趨化因子是一類(lèi)能使細(xì)胞發(fā)生趨化運(yùn)動(dòng)的小分子分泌蛋白，能夠刺激細(xì)胞向高濃度??刺激物定向移動(dòng)，參與了機(jī)體免疫應(yīng)答以及炎癥過(guò)程［２７］。機(jī)體發(fā)生典型炎癥反應(yīng)后，趨??化因子能誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞游走到炎癥部位，同時(shí)參與天然免疫和以及獲得性免疫應(yīng)答機(jī)??制，抑制病毒感染并且增強(qiáng)Ｔ淋巴細(xì)胞應(yīng)答［２８］。??Ｃｃｌ２４?（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｌｉｇａｎｄ２４）隸屬于趨化因子家族，也被稱(chēng)為ｅｏｔａｘｉｎ－２，最早在致??敏豚鼠抗原刺激后的肺泡灌洗液中發(fā)現(xiàn)，有實(shí)驗(yàn)證實(shí)其在炎癥反應(yīng)中具有強(qiáng)烈且高特異??性趨化作用［２９］。當(dāng)機(jī)體受到外界刺激，致敏肥大細(xì)胞迅速釋放介質(zhì)，包括組胺和趨化因??子，趨化因子在釋放的同時(shí)也能夠募集其他炎癥因子，從而加重炎癥反應(yīng)［３Ｇ］。有研宄觀??察到雷公藤紅素對(duì)支氣管哮喘小鼠氣道炎癥的抑制作用，發(fā)現(xiàn)雷公藤紅素可以抑制肥大??細(xì)胞產(chǎn)生組胺和趨化因子ｔ３１］。??Ｃｃｒ６趨化因子受體６?（ｃｈｅｍｏｋｉｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒ６）與Ｃｃｌ２４同屬于趨化因子家族，趨化因??子受體是一類(lèi)含有７個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的Ｇ－蛋白偶聯(lián)受體（ＧＰＣＲｓ），能夠介導(dǎo)趨化因子行??

圖４不同時(shí)間和濃度的Ｐ物質(zhì)處理下Ｐ８１５細(xì)胞的存活率??

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本文編號(hào)：3011358