目的:本研究選擇正常及肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激模型大鼠為研究對象,以白藜蘆醇為工具藥物,考察肝纖維化疾病模型下內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對UGTs代謝酶表達及活性的影響;通過在體外孵育實驗中分別加入UGT1A1特異性抑制劑膽紅素、UGT1A7和UGT1A9的選擇性抑制劑厚樸酚,和UGT1A9特異性抑制劑尼氟酸,考察通過大鼠肝微粒體和細胞裂解酶介導的白藜蘆醇體外孵育實驗中,起主要作用的UGTs亞型;通過構(gòu)建內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激模型細胞及阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路模型細胞,研究內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對白藜蘆醇II相代謝影響的分子機制。本研究的結(jié)果將為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激影響藥物代謝的相關(guān)研究提供理論依據(jù)和實驗基礎,也為白藜蘆醇在臨床上安全、合理、有效應用提供科學指導。方法:本實驗首先建立大鼠肝纖維化所引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激動物模型,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激HepG2細胞模型及阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路的HepG2細胞模型;采用UPLC-PDA法對白藜蘆醇及其代謝產(chǎn)物進行定量分析;建立葡萄糖醛酸化代謝反應體外孵育模型,通過水解法求出白藜蘆醇的代謝產(chǎn)物與母藥之間的轉(zhuǎn)換因子;用Western blot法測定并比較正常組及模型組大鼠,正常及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激細胞模型,阻斷內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激通路細... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

白藜蘆醇及其UGTs代謝物的UPLC-PDA色譜圖

圖 2-1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相應通路在正常及模型組大鼠肝中蛋白的相對表達。數(shù)據(jù)均來自 3 次行實驗，組間差異用 Student’s t 檢驗分析，*p<0.05，***p<0.001。5.2 肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對大鼠 UGTs 蛋白表達的影響這部分數(shù)據(jù)考察肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激模型是否改變 UGTs 蛋白表平。實驗數(shù)據(jù)顯示，如圖 2-2 所示，與正常組相比，模型組大鼠肝臟中 UGT1A1UGT1A7 表達分別增高 2.21，1.90 倍，差異非常顯著（p<0.01）。

圖 2-1 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相應通路在正常及模型組大鼠肝中蛋白的相對表達。數(shù)據(jù)均來自 3 次平行實驗，組間差異用 Student’s t 檢驗分析，*p<0.05，***p<0.001。5.2 肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激對大鼠 UGTs 蛋白表達的影響這部分數(shù)據(jù)考察肝纖維化引發(fā)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激模型是否改變 UGTs 蛋白表水平。實驗數(shù)據(jù)顯示，如圖 2-2 所示，與正常組相比，模型組大鼠肝臟中 UGT1A1，UGT1A7 表達分別增高 2.21，1.90 倍，差異非常顯著（p<0.01）。


本文編號：3005451