目的:研究黃芪多糖體外對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞、正常人淋巴管內(nèi)皮HLEC細(xì)胞增殖能力的影響,以及對(duì)淋巴管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF-C蛋白及mRNA表達(dá)的影響,探討黃芪多糖對(duì)大腸癌的抗癌作用與淋巴管生成之間的關(guān)系。方法:分別用不同濃度黃芪多糖（0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml）與人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞株、正常人淋巴管內(nèi)皮HLEC細(xì)胞株共培養(yǎng),培養(yǎng)24h、48h、72h、96h后,用細(xì)胞增殖/毒性實(shí)驗(yàn)（CCK-8）檢測(cè)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞、正常人淋巴管內(nèi)皮HLEC細(xì)胞活性及增殖能力的影響,研究黃芪多糖對(duì)兩種細(xì)胞的作用及其最佳作用濃度和作用時(shí)間。免疫蛋白印跡（Western Blot）法檢測(cè)黃芪多糖對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞、正常人淋巴管內(nèi)皮HLEC細(xì)胞VEGF-C蛋白表達(dá)的影響。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）法檢測(cè)黃芪多糖對(duì)人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞、正常人淋巴管內(nèi)皮HLEC細(xì)胞VEGF-C mRNA表達(dá)的影響。采用SPASS 21.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果:人結(jié)腸癌LOVO細(xì)胞經(jīng)過(guò)與不同濃度黃芪多糖（0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg... 

【文章來(lái)源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

細(xì)胞消化過(guò)程

B：培養(yǎng) 2d。C：培養(yǎng) 3d。D：培養(yǎng) 4d。圖 1 細(xì)胞形態(tài)變化（2）細(xì)胞傳代：①消毒：將需要的 PBS 溶液、細(xì)胞完全培養(yǎng)基、1ml 移液器及槍頭、0.25%胰蛋白酶溶液、酒精燈置于超凈操作臺(tái)內(nèi)，紫外線消毒 30min。②PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞：的 LOVO 細(xì)胞株、HLEC 細(xì)胞株培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)上清液，然后使用 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2次。③胰酶消化：用1ml移液器分別向LOVO細(xì)胞、HLEC細(xì)胞培養(yǎng)瓶加入1ml、2ml 0.25%胰蛋白酶溶液，置于 37℃、5%CO2及濕度為 70%-80%的培養(yǎng)箱中消化 1min。在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，分別使用 1ml 移液器加入 1ml、2ml 完全培養(yǎng)基終止消化，并輕輕吹打均勻?yàn)榧?xì)胞懸液（見(jiàn)圖 2）。

（2）黃芪多糖溶液的配制：每個(gè)孔需要加 100μl 黃芪多糖溶液。共配制 12.8ml 黃芪多糖溶液。所需黃芪多糖總質(zhì)量為：每組 4 個(gè)孔需要黃芪多糖溶液體積×黃芪多糖濃度，總質(zhì)量為 16mg，因?qū)嶒?yàn)過(guò)程中藥品會(huì)有取損失，故稱(chēng)取 18mg 的黃芪多糖藥物充分溶解到 9ml 的完全培養(yǎng)基中，得到濃度為 2mg/ml 的母液，無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾，臨用時(shí)用完全培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋?zhuān)♂尩剿铦舛?0.5mg/ml、1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml。2.2.3 CCK-8 檢測(cè)方法（1）配制細(xì)胞懸液：分別采用對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人結(jié)腸癌 LOVO 細(xì)胞、人淋巴管內(nèi)皮 HLEC細(xì)胞→胰酶消化→用完全培養(yǎng)基終止消化→反復(fù)吹打混勻成細(xì)胞懸液。（2）細(xì)胞計(jì)數(shù)：將血球計(jì)數(shù)板及蓋片擦試干凈，并將蓋片蓋在計(jì)數(shù)板上。將細(xì)胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿(mǎn)蓋片和計(jì)數(shù)板之間，在倒置顯微鏡下進(jìn)行細(xì)胞記數(shù)。計(jì)算計(jì)數(shù)板四大格細(xì)胞總數(shù)，壓線細(xì)胞只計(jì)左側(cè)和上方的，見(jiàn)圖 3。然后按公式計(jì)算：細(xì)胞數(shù)/ml＝4 大格細(xì)胞總數(shù)/4×104。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]黃芪多糖對(duì)P53基因介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)與胃癌發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性研究[D]. 聶超.南京中醫(yī)藥大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3005056