目的:通過游離脂肪酸建立非酒精性脂肪肝（NAFL）細胞模型,研究當歸六黃湯（DGLHD）對此細胞模型的作用及其機制;進一步探討DGLHD對NAFL小鼠模型的作用及其機制。方法:首先,用不同濃度的游離脂肪酸（油酸:棕櫚酸=2:1）培養(yǎng)HepG2細胞,MTT法檢測細胞活性,以油紅O染色定性觀察細胞內(nèi)脂滴,油紅O比色法測定脂質(zhì)含量,酶法檢測模型組細胞內(nèi)甘油三酯（TG）含量。然后,通過FFA誘導(dǎo)HepG2細胞建立NAFL模型后,給予不同劑量（2.5、5、10 mg/mL）的DGLHD處理,采用油紅O染色觀察細胞內(nèi)脂質(zhì)累積情況,酶法檢測細胞內(nèi)TG含量;Real-time PCR檢測PI3K、Akt、mTOR、GSK3β、GLUT4、ACC-1和CD36的表達,Western blot測定p-PI3K、t-PI3K、p-Akt和t-Akt的蛋白表達。最后,通過高脂飼料喂養(yǎng)（HFD）誘導(dǎo)NAFL小鼠模型,給予HFD 4周后,灌胃給予不同劑量的DGLHD（10、5、2.5 g/kg）,持續(xù)給藥8周。（1）分析肝臟、脂肪組織的病理切片,油紅O染色檢測肝臟內(nèi)滴,檢測血清和組織中的TG、游離脂肪酸（NEFA... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學(xué)位級別】：碩士

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FFA對HepG2細胞活性的影響

viability.#P<0.05,##P<0.01 compared with Control group.1.2 FFA 對 HepG2 細胞內(nèi)脂質(zhì)累積的影響采用油紅 O 染色法，觀察并測定 FFA 對 HepG2 細胞內(nèi)脂滴和脂質(zhì)含量的影響。如圖 3 顯示，光學(xué)顯微鏡下，可觀察到對照組中 HepG2 細胞邊緣清晰，細胞核呈藍紫色，細胞內(nèi)少見紅色微小脂滴；隨著 FFA 濃度的升高，可見各實驗組中細胞內(nèi)的紅色脂滴逐漸增多，而當 FFA 濃度 > 1mM 時，HepG2 細胞數(shù)量呈現(xiàn)大幅度減少。由圖 4 可知，各組細胞內(nèi)的脂質(zhì)含量，亦隨著 FFA 濃度的升高而增多，1mM 時含量最多；而當濃度增至 1.25mM 時，脂質(zhì)含量呈現(xiàn)降低趨勢。結(jié)果表明，F(xiàn)FA 濃度為 1mM 時，HepG2 細胞內(nèi)脂質(zhì)累積最多。結(jié)合 MTT檢測細胞活性試驗，確定 FFA 的最佳作用為 24h，最佳作用濃度為 1mM。

2 細胞內(nèi)脂質(zhì)含量的影響。與正常對照組比較，#P<0.05FA on lipid content in HepG2 Cells.#P<0.05,##P<0.01 com內(nèi)甘油三酯的測定，與對照組比較，模型組 HepG2 細胞內(nèi)的 TG 含結(jié)果一致。提示，選擇 1mM 的 FFA（OA:PA=2h，可以成功建立體外 NAFL 細胞模型。

【參考文獻】：
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本文編號：2985422