目的研究大黃素對(duì)人類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞（RA-FLS）腫瘤壞死因子ɑ（TNF-α）、缺氧誘導(dǎo)因子1α（HIF-1α）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）以及一氧化氮（NO）表達(dá)的影響,探討大黃素通過(guò)調(diào)控TNF-α-HIF-1α-iNOS–NO信號(hào)通路干預(yù)RA的機(jī)制。方法培養(yǎng)來(lái)源于人的RA-FLS與正常-FLS,設(shè)立正常組、模型組、高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽(yáng)性組。正常組用正常-FLS,其余5組用RA-FLS。高/中/低劑量組分別予80μmol·L^-1、40μmol·L^-1及20μmol·L^-1的大黃素溶液。陽(yáng)性組予0.1mg·L^-1地塞米松溶液。藥物干預(yù)24h、48h、72h、96h,用HE染色法觀測(cè)滑膜細(xì)胞的生長(zhǎng)和形態(tài)學(xué)改變;用ELISA法與硝酸還原酶法檢測(cè)滑膜細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-α、HIF-1α、iNOS及NO表達(dá)變化;用Western blot法檢測(cè)滑膜細(xì)胞中TNF-α、HIF-1α以及iNOS表達(dá)水平。結(jié)果 HE染色結(jié)果顯示:以梭形為主的滑膜細(xì)胞均貼壁生長(zhǎng),卵圓形胞核居于細(xì)胞中央,R... 

【文章來(lái)源】：時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥. 2020,31(04)北大核心

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滑膜細(xì)胞HE染色圖片(200×)

RA主要病理改變?yōu)槌掷m(xù)性滑膜炎、血管翳增生以及骨與軟骨損傷[1]。TNF-α是一種調(diào)節(jié)機(jī)體免疫的促炎細(xì)胞因子,其產(chǎn)生的免疫損害是導(dǎo)致RA慢性炎癥的主要因素[8]。HIF-1α是機(jī)體由缺血、缺氧環(huán)境刺激產(chǎn)生的炎癥調(diào)節(jié)因子[9]。NO是細(xì)胞內(nèi)調(diào)節(jié)組織代謝的重要信號(hào)分子,而NOS是合成NO的關(guān)鍵酶[10]。TNF-α受到γ-干擾素(Interferon-γ,IFN-γ)刺激,激活核轉(zhuǎn)錄因子κB(nuclear factor κB,NF-κB),誘導(dǎo)HIF高表達(dá),HIF - 1α又誘導(dǎo)其下游基因iNOS 、VEGF轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。VEGF 直接促進(jìn)血管增生,iNOS 催化L-精氨酸生成NO,一方面增加血管的通透性,加速血管新生;另一方面又刺激環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2,COX-2 )釋放,抑制軟骨細(xì)胞合成Ⅱ型膠原去濡養(yǎng)骨與軟骨,軟骨細(xì)胞增值減少而凋亡增加,最終導(dǎo)致RA病情發(fā)展[11～13]。本實(shí)驗(yàn)用80μmol·L-1、40μmol·L-1以及20μmol·L-1大黃素分別干預(yù)人RA-FLS 24h、48h、72h以及96h,檢測(cè)人RA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO水平,探討不同濃度大黃素干預(yù)不同時(shí)間后對(duì)人RA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)液中相關(guān)蛋白表達(dá)的影響和對(duì)RA的作用機(jī)制。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,與人正常-FLS比較,RA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表達(dá)均有升高,并且隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO增加幅度越來(lái)越大,尤其在96h段增加最多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。用不同濃度大黃素干預(yù)24h、48h、72h以及96h后,人RA-FLS細(xì)胞培養(yǎng)液中TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表達(dá)水平均比模型組降低,并且隨著藥物干預(yù)時(shí)間延長(zhǎng),下降幅度越來(lái)越大,尤其在96h段下降最多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。大黃素組TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO表達(dá)在4個(gè)時(shí)間段均表現(xiàn)為高劑量組下降最多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。陽(yáng)性組TNF-ɑ、HIF-1ɑ、iNOS以及NO在4個(gè)時(shí)間段表現(xiàn)為大多與中劑量組相近。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
[1]斷藤益母湯及其組方藥物對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠骨代謝的影響及其機(jī)制研究[D]. 盧軍.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 2016
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本文編號(hào)：2984808