目的:二氫楊梅素,是在篩選NF-κB抑制劑時(shí),發(fā)現(xiàn)的一種有效的源自天然產(chǎn)物的小分子抑制劑。它是從葡萄科蛇葡萄屬的一種木質(zhì)藤本植物中提取出來(lái)的黃酮類化合物,具有清除自由基、抗氧化、抗血栓、抗腫瘤、消炎等多種活性。在本研究中,主要檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HeLa細(xì)胞中NF-κB活化的及其信號(hào)通路作用機(jī)制的影響。方法:①用MTT實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)HeLa細(xì)胞存活率的影響;②采用熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)NF-κB轉(zhuǎn)錄活性的影響;③通過(guò)蛋白免疫印跡法來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)NF-κB相關(guān)蛋白表達(dá)影響;④利用RT-PCR實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)cyclin D1/iNOS/VEGF mRNA表達(dá)的影響;⑤免疫熒光試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)藥物對(duì)p65核轉(zhuǎn)位的影響;⑥蛋白免疫印跡法來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)TNFR1信號(hào)通路的影響。⑦采用MTT法、細(xì)胞集落實(shí)驗(yàn)、EdU實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)HeLa細(xì)胞增殖的影響;⑧利用流式細(xì)胞術(shù)來(lái)檢測(cè)藥物對(duì)HeLa細(xì)胞凋亡率的影響。結(jié)果:1.MTT實(shí)驗(yàn)和熒光素酶報(bào)告基因顯示,二氫楊梅素抑制TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB活化且在20-200 uM時(shí),無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。沒(méi)有明顯的... 

【文章來(lái)源】：延邊大學(xué)吉林省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：54 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１－２經(jīng)典和非經(jīng)典ＮＦ－ｋＢ通路示意圖??１．２ＮＦ－ＫＢ、炎癥在癌癥中的發(fā)展??

碩士學(xué)位論文?二ａ楊梅素對(duì)ｎｆ－ｋｂ活化及其信號(hào)通路作用機(jī)制第三章結(jié)果??氫楊梅素對(duì)ＮＦ－ｋＢ轉(zhuǎn)錄活性的影響??光素酶報(bào)告基因檢測(cè)了二氫楊梅素對(duì)ＮＦ－ｋＢ轉(zhuǎn)錄活性的影響。將Ｍ、２０ｐＭ、５０ｐＭ、ＩＯＯｋＭ、２００?ｐＭ依次加入轉(zhuǎn)染了?ｐＮＦ－ＫＢ－ＬｕｃＬａ細(xì)胞中，處理ＴＮＦ－ｃｔ，使用化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)熒光強(qiáng)度。結(jié)果顯素劑量性抑制ＮＦ－ｋＢ的轉(zhuǎn)錄活性。?????

?＋?ＴＮＦ－ａ??ｓｔｉｍｕｌｉ?０?２０?５０?１００?２００?ＤＭＹ?＿＞??圖３－１熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)二氫楊梅素對(duì)ＮＦ－ｋＢ轉(zhuǎn)錄活性的影響??（＊ｐ＜?０．０５，?＊＊ｐ＜０．０１，?＊＊＊ｐ＜０．００１）??３．２二氫楊梅素對(duì)細(xì)胞毒性的影響??ＭＴＴ實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了二氫楊梅素對(duì)細(xì)胞毒性的影響。將藥物按濃度Ｏ＾Ｍ、２０?ｐＭ??、５０＿１、ｌＯＯｐＭ、２００?＾ｉＭ依次加入ＨｅＬａ細(xì)胞中，使用酶標(biāo)儀在５７０?ｎｍ處??檢測(cè)吸光度。結(jié)果顯示，二氫楊梅素在２０－２００?ｕＭ時(shí)，無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。??２７??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]顯齒蛇葡萄中總黃酮和二氫楊梅素的含量測(cè)定[J]. 何桂霞,裴剛,周天達(dá),周雪仙.  中國(guó)中藥雜志. 2000(07)



本文編號(hào)：2960380