發(fā)布時(shí)間：2020-12-30 18:57

　　目的:本研究擬通過(guò)建立體外結(jié)腸癌細(xì)胞株模型觀察蜂斗菜素對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲和遷移,以及在裸鼠異種移植瘤模型中觀察其對(duì)裸鼠移植瘤生長(zhǎng)的影響。通過(guò)檢測(cè)PI3K-Akt-m TOR信號(hào)通路的相關(guān)分子,初步研究其影響結(jié)腸癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制,為蜂斗菜素的臨床應(yīng)用提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù),也為將蜂斗菜素開(kāi)發(fā)成新的抗腫瘤藥物之一奠定基礎(chǔ)。方法:在體外實(shí)驗(yàn)中,采用MTT法檢測(cè)蜂斗菜素對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞株Caco-2、Lo Vo、SW-620和HT-29增殖抑制率的影響;采用流式細(xì)胞儀Annexine V-FITC/PI染色技術(shù)探究細(xì)胞凋亡率的變化;采用流式細(xì)胞PI染色技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化;采用Hoechst 33258熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞核的變化;采用JC-1染色法檢測(cè)細(xì)胞線粒體膜電位;使用劃痕愈合實(shí)驗(yàn)測(cè)試對(duì)細(xì)胞遷移能力的影響;Transwell實(shí)驗(yàn)用于探究細(xì)胞的侵襲能力的變化;采用PCR法檢測(cè)細(xì)胞PI3K-Akt-m TOR信號(hào)通路相關(guān)m RNA（Akt、m TOR、P70S6K、MMP-3、MMP-9、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2）的表達(dá)水平;并采用Western bl... 

【文章來(lái)源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：95 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

蜂斗菜素的化學(xué)結(jié)構(gòu)（CHO，分子量=316.44）

19Figure 2-2 Petasin induced apoptosis in SW-620 cells. SW-620 cells were treated with 25μmol/L Petasin for 48 h. Apoptosis was detected byAnnexin-V-FITC/PI staining and flowcytometry. p < 0.01 versus control cells.圖 2-2 蜂斗菜素(25 μmol/L)處理 48 h 對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞 SW-620 細(xì)胞凋亡的影響.與對(duì)照組相比，p < 0.012.4.3 蜂斗菜素對(duì)結(jié)腸癌 SW-620 細(xì)胞周期的影響采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)了 SW-620 細(xì)胞周期的變化，結(jié)果見(jiàn)圖 2-3。對(duì)照組胞周期比率依次為 G0/G1（64.15 ± 8.89）%、S（24.51 ± 2.29）%和 G2/M（7.± 0.89）%；蜂斗菜素組（25 μmol/L）細(xì)胞周期比率依次為 G0/G1（64.39 ± 11.97）%S（24.81 ± 3.62）%和 G2/M（9.05 ± 1.28）%。兩組之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），表明蜂斗菜素對(duì) SW-620 細(xì)胞周期無(wú)顯著影響。

20圖 2-3 蜂斗菜素(25 μmol/L)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞 SW-620 細(xì)胞周期影響。Figure 2-3 Effects of petasin on cell cycle progression in SW-620 cells.2.4.4 蜂斗菜素對(duì)結(jié)腸癌 SW-620 細(xì)胞核形態(tài)的影響如圖 2-4 所示，經(jīng) Hoechst33258 熒光染色后，于熒光顯微鏡下觀察可對(duì)照組 SW-620 細(xì)胞核呈現(xiàn)出均勻微弱的藍(lán)色熒光，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，而蜂斗

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]蜂斗菜素抗神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞增殖作用的分子機(jī)制研究[D]. 王明洋.鄭州大學(xué) 2014
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本文編號(hào)：2948135