目的:本研究擬通過建立體外結(jié)腸癌細胞株模型觀察蜂斗菜素對結(jié)腸癌細胞的增殖、凋亡、侵襲和遷移,以及在裸鼠異種移植瘤模型中觀察其對裸鼠移植瘤生長的影響。通過檢測PI3K-Akt-m TOR信號通路的相關(guān)分子,初步研究其影響結(jié)腸癌細胞生物學行為的機制,為蜂斗菜素的臨床應(yīng)用提供新的實驗依據(jù),也為將蜂斗菜素開發(fā)成新的抗腫瘤藥物之一奠定基礎(chǔ)。方法:在體外實驗中,采用MTT法檢測蜂斗菜素對人結(jié)腸癌細胞株Caco-2、Lo Vo、SW-620和HT-29增殖抑制率的影響;采用流式細胞儀Annexine V-FITC/PI染色技術(shù)探究細胞凋亡率的變化;采用流式細胞PI染色技術(shù)檢測細胞周期的變化;采用Hoechst 33258熒光染色法觀察凋亡細胞核的變化;采用JC-1染色法檢測細胞線粒體膜電位;使用劃痕愈合實驗測試對細胞遷移能力的影響;Transwell實驗用于探究細胞的侵襲能力的變化;采用PCR法檢測細胞PI3K-Akt-m TOR信號通路相關(guān)m RNA（Akt、m TOR、P70S6K、MMP-3、MMP-9、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2）的表達水平;并采用Western bl... 

【文章來源】：蘭州大學甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：博士

【部分圖文】：

蜂斗菜素的化學結(jié)構(gòu)（CHO，分子量=316.44）

19Figure 2-2 Petasin induced apoptosis in SW-620 cells. SW-620 cells were treated with 25μmol/L Petasin for 48 h. Apoptosis was detected byAnnexin-V-FITC/PI staining and flowcytometry. p < 0.01 versus control cells.圖 2-2 蜂斗菜素(25 μmol/L)處理 48 h 對結(jié)腸癌細胞 SW-620 細胞凋亡的影響.與對照組相比，p < 0.012.4.3 蜂斗菜素對結(jié)腸癌 SW-620 細胞周期的影響采用流式細胞術(shù)檢測了 SW-620 細胞周期的變化，結(jié)果見圖 2-3。對照組胞周期比率依次為 G0/G1（64.15 ± 8.89）%、S（24.51 ± 2.29）%和 G2/M（7.± 0.89）%；蜂斗菜素組（25 μmol/L）細胞周期比率依次為 G0/G1（64.39 ± 11.97）%S（24.81 ± 3.62）%和 G2/M（9.05 ± 1.28）%。兩組之間進行統(tǒng)計學分析發(fā)現(xiàn)異無統(tǒng)計學意義（p＞0.05），表明蜂斗菜素對 SW-620 細胞周期無顯著影響。

20圖 2-3 蜂斗菜素(25 μmol/L)對結(jié)腸癌細胞 SW-620 細胞周期影響。Figure 2-3 Effects of petasin on cell cycle progression in SW-620 cells.2.4.4 蜂斗菜素對結(jié)腸癌 SW-620 細胞核形態(tài)的影響如圖 2-4 所示，經(jīng) Hoechst33258 熒光染色后，于熒光顯微鏡下觀察可對照組 SW-620 細胞核呈現(xiàn)出均勻微弱的藍色熒光，細胞結(jié)構(gòu)完整，而蜂斗

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：2948135