發(fā)布時間：2020-12-27 12:06

　　葛根湯,來源于東漢張仲景的《傷寒論》,是具有代表性的經(jīng)方之一。葛根湯為解表劑,具有發(fā)汗解表,升津舒筋的作用,在臨床上主要應(yīng)用于肩周炎、病毒性腸炎、風(fēng)寒感冒等疾病。葛根湯在抗炎方面臨床應(yīng)用比較成熟,但其具體的抗炎分子機(jī)理尚不清楚,因此以2015版中國藥典記載的葛根湯處方為例,研究體內(nèi)抗炎活性,以LPS激活RAW 264.7細(xì)胞建立炎癥模型,探究葛根湯的抗炎分子機(jī)制。采用高效液相色譜法（HPLC）對葛根湯組方各中藥材的指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測定,評價葛根湯各組方中藥材的質(zhì)量。隨機(jī)抽取兩批葛根湯中藥材進(jìn)行測定,實驗結(jié)果表明各組方中藥材中指標(biāo)性成分的含量均符合2015版藥典規(guī)定。按照2015版中國藥典記載的方法制備葛根湯溶液。取葛根和麻黃溫浸30 min,與桂枝、白芍、甘草、生姜和大棗五味藥材合并一起進(jìn)行煎煮兩次,每次30 min,合并煎液,減壓濃縮至一定相對密度,即得葛根湯溶液,供后續(xù)實驗使用。通過檢測葛根湯對角叉菜膠致大鼠足腫脹作用和二甲苯致小鼠耳腫脹作用兩個急性炎癥模型來研究葛根湯的體內(nèi)抗炎活性。角叉菜膠致大鼠足腫脹和二甲苯致小鼠耳腫脹實驗結(jié)果表明,葛根湯能夠抑制角叉菜膠致大鼠足腫脹和二甲苯... 

【文章來源】：煙臺大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 前言
    1.1 葛根湯的主要藥理作用
        1.1.1 降血壓
        1.1.2 抗炎鎮(zhèn)痛作用
        1.1.3 抗流感、解熱作用
        1.1.4 抗過敏作用
        1.1.5 免疫調(diào)節(jié)作用
    1.2 葛根湯的主要臨床應(yīng)用
        1.2.1 在心血管方面的作用
        1.2.2 感冒
        1.2.3 頸椎病
        1.2.4 肩周炎
        1.2.5 原發(fā)性痛經(jīng)
        1.2.6 呼吸道感染
        1.2.7 其它作用
    1.3 立題依據(jù)及意義
2 實驗材料和方法
    2.1 藥材
    2.2 主要實驗儀器
    2.3 實驗材料
        2.3.1 試劑和藥品
        2.3.2 抗體
        2.3.3 細(xì)胞株
    2.4 主要溶液配制
        2.4.1 RPMI-1640 完全培養(yǎng)基
        2.4.2 無菌PBS緩沖溶液（pH7.2-7.4）
        2.4.3 MTT溶液（5 mg/mL）
        2.4.4 脂多糖（LPS）溶液
        2.4.5 SDS-PAGE上樣緩沖溶液（5×）
        2.4.6 電泳緩沖液（5×）
        2.4.7 Griess A溶液
        2.4.8 Griess B溶液
        2.4.9 TBS-T溶液
        2.4.10 7%脫脂奶粉
        2.4.11 1%角叉菜膠溶液
        2.4.12 葛根湯顆粒溶液
        2.4.13 醋酸地塞米松溶液
    2.5 高效液相色譜法測定葛根湯各組方藥材中指標(biāo)性成分的含量
        2.5.1 實驗原理
        2.5.2 儀器
        2.5.3 實驗方法
    2.6 葛根湯的制備
    2.7 葛根湯對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
        2.7.1 實驗原理
        2.7.2 實驗動物
        2.7.3 實驗方法
        2.7.4 實驗流程圖
    2.8 葛根湯對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響
        2.8.1 實驗原理
        2.8.2 實驗動物
        2.8.3 實驗方法
        2.8.4 實驗流程圖
    2.9 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.9.1 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.9.2 細(xì)胞傳代培養(yǎng)
        2.9.3 細(xì)胞計數(shù)
        2.9.4 細(xì)胞凍存
    2.10 細(xì)胞存活率實驗
        2.10.1 實驗原理
        2.10.2 實驗方法
        2.10.3 實驗流程圖
    2.11 Griess法測定NO水平
        2.11.1 實驗原理
        2.11.2 實驗方法
        2.11.3 實驗流程圖
    2.12 ELISA實驗
        2.12.1 實驗原理
        2.12.2 ELISA法測定TNF-a水平
        2.12.3 ELISA法測定PGE2 水平
        2.12.4 ELISA法測定IL-6 水平
    2.13 免疫印跡法檢測相關(guān)蛋白表達(dá)水平
        2.13.1 實驗原理
        2.13.2 蛋白提取
        2.13.3 蛋白樣品變性
        2.13.4 SDS-PAGE凝膠電泳
        2.13.5 轉(zhuǎn)膜
        2.13.6 封閉
        2.13.7 一抗孵育
        2.13.8 二抗孵育
        2.13.9 化學(xué)發(fā)光反應(yīng)
        2.13.10 數(shù)據(jù)處理
        2.13.11 實驗流程圖
3 實驗結(jié)果
    3.1 HPLC法測定葛根湯各組方各藥材中指標(biāo)性成分的含量
    3.2 葛根湯對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響
    3.3 葛根湯對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響
    3.4 MTT法測定葛根湯對RAW264.7 細(xì)胞的細(xì)胞毒性
    3.5 葛根湯對LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞釋放NO的抑制作用
    3.6 葛根湯對LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞釋放TNF-α的抑制作用
2 的抑制作用">    3.7 葛根湯對LPS誘導(dǎo)RAW274.7 細(xì)胞釋放PGE₂ 的抑制作用
    3.8 葛根湯對LPS誘導(dǎo)RAW264.7 細(xì)胞釋放IL-6 的抑制作用
    3.9 Western Blot實驗結(jié)果
        3.9.1 葛根湯對iNOS、COX-2 蛋白表達(dá)水平的影響
        3.9.2 葛根湯對p-ERK、p-JNK和 p-p38 蛋白表達(dá)的影響
        3.9.3 葛根湯對IkB-α蛋白降解以及p65 核轉(zhuǎn)位的影響
4 討論
5 結(jié)論
附錄
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]急性胰腺炎患者血清ET、MCP-1、TNF-α、IL-6水平變化及意義[J]. 楊晴,林剛,林周,薛育政.  山東醫(yī)藥. 2018(41)
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碩士論文
[1]中國萊姆病阿弗西尼基因型感染蛋白免疫印跡法診斷方法的研究[D]. 劉志云.南華大學(xué) 2011



本文編號：2941704