目的觀察雞豆黃素A（Bioch A）對(duì)1-甲基-4-苯基吡啶離子（MPP⁺）誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞的凋亡是否有保護(hù)作用。方法用MTT法檢測(cè)MPP⁺對(duì)PC12細(xì)胞的毒性作用和Bioch A的最適藥物濃度,為后續(xù)實(shí)驗(yàn)篩出誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的MPP⁺劑量和恰當(dāng)?shù)腂ioch A劑量。常規(guī)培養(yǎng)的PC12細(xì)胞被分為:Control組、MPP⁺（1μmol/L）組、Bioch A（1.25μmol/L）+MPP⁺組、Bioch A（2.5μmol/L）+MPP⁺組、Bioch A（5μmol/L）+MPP⁺組、雌二醇（E2）（0.1μmol/L）+MPP⁺組。DCFH-DA探針被用于活性氧（ROS）的檢測(cè);Annexin V-FITC/PI雙染法被用作細(xì)胞凋亡百分比的測(cè)定;cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表達(dá)水平采用Western blot法檢測(cè)。結(jié)果 MPP⁺模型組較Con... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020年08期 北大核心

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【部分圖文】：

Bioch A對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞ROS表達(dá)的影響 ( x ˉ ±s,n=3)

中樞退行性疾病與神經(jīng)元功能的喪失有一定關(guān)聯(lián),PD患者的黑質(zhì)致密部80%的DA能神經(jīng)元喪失了正常的功能。近年來(lái),外源性的神經(jīng)毒素誘導(dǎo)形成的PD細(xì)胞模型已成為PD發(fā)病機(jī)制重要的研究手段[8]。來(lái)源于大鼠腎上腺髓質(zhì)嗜鉻細(xì)胞瘤的PC12細(xì)胞株,具有神經(jīng)細(xì)胞的特性, 且可穩(wěn)定傳代。MPP+是一種神經(jīng)毒素, 能夠引起神經(jīng)細(xì)胞的氧化應(yīng)激,因此可作為誘導(dǎo)劑為PD的發(fā)病機(jī)制研究制備細(xì)胞模型[9]。MPP+可以直接被DA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有選擇性的轉(zhuǎn)運(yùn)至DA能神經(jīng)元,使神經(jīng)元線(xiàn)粒體功能出現(xiàn)障礙,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡的出現(xiàn)[10]。本實(shí)驗(yàn)采用MPP+刺激PC12細(xì)胞凋亡建立體外PD模型,觀察 Bioch A 對(duì)MPP+刺激的PC12細(xì)胞凋亡的作用。不同濃度MPP+處理細(xì)胞,結(jié)果顯示1 μmol/L MPP+處理細(xì)胞能引起大約50%細(xì)胞凋亡,因此本實(shí)驗(yàn)選用1 μmol/L MPP+用于后續(xù)造模。圖3 Western Blot檢測(cè)cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表達(dá) ( x ˉ ±s,n=3)

圖2 細(xì)胞流式檢測(cè)Bioch A對(duì)MPP+誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞凋亡的影響 ( x ˉ ±s,n=3)氧化應(yīng)激與許多人類(lèi)變性疾病有關(guān), 如癌癥、動(dòng)脈粥樣硬化以及神經(jīng)退行性病變等,近年的研究[11]表明氧化應(yīng)激與PD的發(fā)生發(fā)展密不可分。ROS增加是氧化應(yīng)激的主要標(biāo)志,在正常的機(jī)體或細(xì)胞內(nèi),ROS 總是與內(nèi)在的抗氧化系統(tǒng)處于動(dòng)態(tài)平衡中。當(dāng)受到外界刺激時(shí),平衡被破壞,從而產(chǎn)生氧化應(yīng)激[12]。在本實(shí)驗(yàn)中,Bioch A預(yù)處理能夠有效抑制MPP+組中的ROS的升高。此結(jié)果提示Bioch A可以減輕PC12細(xì)胞中MPP+誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激。此外,由于ROS作為凋亡啟動(dòng)的一個(gè)重要條件,所以Bioch A也可能調(diào)節(jié)了細(xì)胞的凋亡過(guò)程。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2938940