目的觀察雞豆黃素A（Bioch A）對1-甲基-4-苯基吡啶離子（MPP⁺）誘導的PC12細胞的凋亡是否有保護作用。方法用MTT法檢測MPP⁺對PC12細胞的毒性作用和Bioch A的最適藥物濃度,為后續(xù)實驗篩出誘導細胞凋亡的MPP⁺劑量和恰當?shù)腂ioch A劑量。常規(guī)培養(yǎng)的PC12細胞被分為:Control組、MPP⁺（1μmol/L）組、Bioch A（1.25μmol/L）+MPP⁺組、Bioch A（2.5μmol/L）+MPP⁺組、Bioch A（5μmol/L）+MPP⁺組、雌二醇（E2）（0.1μmol/L）+MPP⁺組。DCFH-DA探針被用于活性氧（ROS）的檢測;Annexin V-FITC/PI雙染法被用作細胞凋亡百分比的測定;cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9的表達水平采用Western blot法檢測。結果 MPP⁺模型組較Con... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2020年08期 北大核心

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【部分圖文】：

Bioch A對MPP+誘導的PC12細胞ROS表達的影響 ( x ˉ ±s,n=3)

中樞退行性疾病與神經元功能的喪失有一定關聯(lián),PD患者的黑質致密部80%的DA能神經元喪失了正常的功能。近年來,外源性的神經毒素誘導形成的PD細胞模型已成為PD發(fā)病機制重要的研究手段[8]。來源于大鼠腎上腺髓質嗜鉻細胞瘤的PC12細胞株,具有神經細胞的特性, 且可穩(wěn)定傳代。MPP+是一種神經毒素, 能夠引起神經細胞的氧化應激,因此可作為誘導劑為PD的發(fā)病機制研究制備細胞模型[9]。MPP+可以直接被DA轉運蛋白有選擇性的轉運至DA能神經元,使神經元線粒體功能出現(xiàn)障礙,進而導致細胞凋亡的出現(xiàn)[10]。本實驗采用MPP+刺激PC12細胞凋亡建立體外PD模型,觀察 Bioch A 對MPP+刺激的PC12細胞凋亡的作用。不同濃度MPP+處理細胞,結果顯示1 μmol/L MPP+處理細胞能引起大約50%細胞凋亡,因此本實驗選用1 μmol/L MPP+用于后續(xù)造模。圖3 Western Blot檢測cleaved Caspase-3和cleaved Caspase-9蛋白的表達 ( x ˉ ±s,n=3)

圖2 細胞流式檢測Bioch A對MPP+誘導的PC12細胞凋亡的影響 ( x ˉ ±s,n=3)氧化應激與許多人類變性疾病有關, 如癌癥、動脈粥樣硬化以及神經退行性病變等,近年的研究[11]表明氧化應激與PD的發(fā)生發(fā)展密不可分。ROS增加是氧化應激的主要標志,在正常的機體或細胞內,ROS 總是與內在的抗氧化系統(tǒng)處于動態(tài)平衡中。當受到外界刺激時,平衡被破壞,從而產生氧化應激[12]。在本實驗中,Bioch A預處理能夠有效抑制MPP+組中的ROS的升高。此結果提示Bioch A可以減輕PC12細胞中MPP+誘導的氧化應激。此外,由于ROS作為凋亡啟動的一個重要條件,所以Bioch A也可能調節(jié)了細胞的凋亡過程。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]氧化應激與帕金森病[J]. 朱羽婷,朱向陽,周永,張冬梅.  中國實用神經疾病雜志. 2019(11)
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[3]蟲草素抑制帕金森病細胞凋亡的caspase激活途徑研究[J]. 姜新,張鑫,顧欣霞,唐亮,樊逸云,余伯成,葛曉群.  沈陽藥科大學學報. 2017(10)
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