目的:香草酸（vanillic acid,VA）是植物次生代謝產(chǎn)生的酚類化合物,現(xiàn)有的實驗研究成果已經(jīng)提供了香草酸對心血管疾病有效的證據(jù)。本課題進一步研究香草酸抗心肌缺氧/復(fù)氧（anoxia/reoxygenation,A/R）損傷的分子機制。方法:以H9c2細(xì)胞為實驗對象,經(jīng)不同濃度的香草酸預(yù)處理后,構(gòu)建心肌A/R損傷模型,MTS法檢測H9c2細(xì)胞生存率,Western Blot法檢測AMPKα2蛋白表達,流式細(xì)胞儀檢測H9c2細(xì)胞活性氧（ROS）水平及線粒體膜電位（ΔΨ_m）變化,分光光度計法檢測H9c2細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）活性、肌酸磷酸激酶（CPK）活性、線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔（mPTP）開放程度和半胱氨酸蛋白酶（caspase-3）活性,流式細(xì)胞儀和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記（TUNEL）法檢測H9c2細(xì)胞凋亡水平。結(jié)果:VA預(yù)處理對心肌A/R損傷保護存在量效關(guān)系,不同濃度的香草酸預(yù)處理各實驗組與A/R組相比,1.00mM VA預(yù)處理組的細(xì)胞存活率增加最顯著（p<0.05）;VA+A/R組的AMPKα2蛋白較A/R組明顯上調(diào)（p<... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮寫及全稱和中文對照表
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 主要材料及試劑
    2.2 實驗主要儀器和設(shè)備
    2.3 實驗方法
        2.3.1 H9c2細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.3.2 慢病毒感染H9c2細(xì)胞
        2.3.3 H9c2細(xì)胞體外缺氧/復(fù)氧（A/R）損傷模型的構(gòu)建
        2.3.4 實驗分組及處理
        2.3.5 MTS法檢測H9c2細(xì)胞存活率
        2.3.6 蛋白質(zhì)免疫印跡（WesternBlot）法檢測H9c2細(xì)胞中蛋白的表達.
        2.3.7 H9c2細(xì)胞乳酸脫氫酶（LDH）和肌酸磷酸激酶（CPK）的活性檢測
        2.3.8 DCFH-DA法檢測H9c2細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）含量
        2.3.9 JC-1法檢測H9c2細(xì)胞線粒體膜電位（ΔΨm）
        2.3.10 分光光度計法檢測H9c2細(xì)胞線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔開放
        2.3.11 分光光度計法檢測H9c2細(xì)胞caspase-3活性
        2.3.12 AnnexinV-FITC和PI雙染色法檢測H9c2細(xì)胞凋亡
        2.3.13 TUNEL法檢測H9c2細(xì)胞凋亡
    2.4 統(tǒng)計學(xué)分析
第3章 結(jié)果
    3.1 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞存活率的影響
    3.2 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞AMPKα2蛋白表達的影響
    3.3 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞LDH和CPK的影響
    3.4 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞ROS生成的影響
    3.5 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞ΔΨm的影響
    3.6 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞mPTP開放的影響
    3.7 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞caspase-3活性的影響
    3.8 香草酸預(yù)處理對A/R損傷后H9c2細(xì)胞凋亡的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻
綜述 AMPK：在心肌缺血中的能量傳遞和存活機制
    參考文獻



本文編號：2934360