目的構(gòu)建慢病毒介導(dǎo)過表達(dá)IL-12基因的BMSCS,觀察IL-12基因轉(zhuǎn)染的BMSCs對胃癌移植瘤模型裸鼠的抑瘤作用,探討半夏瀉心湯與IL-12基因轉(zhuǎn)染BMSCs聯(lián)合對胃癌移植瘤模型裸鼠的抑瘤作用是否有協(xié)同增效作用。方法1、無菌條件下取裸鼠股骨,充分沖洗骨髓腔,加入適量含10%胎牛血清的低糖DMEM,離心5～10 min棄上清,加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。當(dāng)細(xì)胞匯合達(dá)90%以上時0.25%胰酶-EDTA消化傳代。取融合良好的P3代BMSCs,消化、離心,棄上層液體,加入一抗、二抗,孵育,重懸細(xì)胞后上FCM檢測。2、采用LV5空載慢病毒及IL-12過表達(dá)LV5慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs細(xì)胞,48h及72小時后,用倒置熒光顯微鏡觀察BMSCs細(xì)胞轉(zhuǎn)染的情況,計算慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs的效率。經(jīng)嘌呤霉素加壓篩選,并用熒光定量PCR檢測BMSCs細(xì)胞中IL-12的表達(dá),建立穩(wěn)定過表達(dá)IL-12基因的BMSCs細(xì)胞。3、取SPF級健康BALB/C裸鼠,于裸鼠腋窩皮下接種人胃癌BCG-823細(xì)胞,建立人胃癌移植瘤裸鼠模型。4、將人胃癌移植瘤裸鼠隨機(jī)分為成瘤組（模型組）、LV5空載慢病毒轉(zhuǎn)染BMSCs組（空載組）、L... 

【文章來源】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)甘肅省

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

裸鼠BMSCs的形態(tài)學(xué)觀察（倒置相差顯微鏡,×100）

圖 2 流式細(xì)胞儀鑒定裸鼠 BMSCs 細(xì)胞.2 熒光顯微鏡觀察 LV5-IL-12 轉(zhuǎn)染 BMSCs 的效率結(jié)果見圖 3、圖 4。MOI 值為 50 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 以后，普通光鏡下胞形態(tài)規(guī)則，生長良好，熒光顯微鏡下 LV5 空載慢病毒轉(zhuǎn)染的 BMSCs 和 LV5-IL-12染的 BMSCs 綠色熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。72h 以后細(xì)胞融合現(xiàn)象明顯，綠色熒光強(qiáng)度達(dá)到最，轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 90%。

熒光顯微鏡觀察 LV5-IL-12 轉(zhuǎn)染 BMSCs 的效率結(jié)果見圖 3、圖 4。MOI 值為 50 轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，在細(xì)胞轉(zhuǎn)染 48h 以后，普通光形態(tài)規(guī)則，生長良好，熒光顯微鏡下 LV5 空載慢病毒轉(zhuǎn)染的 BMSCs 和 LV5的 BMSCs 綠色熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。72h 以后細(xì)胞融合現(xiàn)象明顯，綠色熒光強(qiáng)度達(dá)轉(zhuǎn)染效率可達(dá) 90%。轉(zhuǎn)染 48h 自然光（×100） 轉(zhuǎn)染 72h 自然光（×100）

【參考文獻(xiàn)】：
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本文編號：2932174