發(fā)布時間：2020-12-19 06:49

　　目的探討胞外信號調(diào)節(jié)激酶（ERK）、哺乳動物雷帕霉素靶蛋白（m TOR）、蛋白激酶B（AKT）、Toll樣受體4（TLR4）信號傳導(dǎo)通路在蟲草素上調(diào)沉默信息調(diào)節(jié)因子2同源蛋白1（SIRT1）的表達(dá)、減少高糖環(huán)境下人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（HUVECs）凋亡中的作用,旨在明確蟲草素對內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)制。方法選取處于對數(shù)生長期的狀態(tài)優(yōu)良的2-3代HUVECs用于實驗。選取四個通路的抑制劑進(jìn)行相關(guān)信號通路的研究。實驗分組:（1）對照組;（2）高糖組;（3）白藜蘆醇組;（4）10μM蟲草素組;（5）20μM蟲草素組;（6）雷帕霉素（m TOR抑制劑）組;（7）雷帕霉素+10μM蟲草素組;（8）雷帕霉素+20μM蟲草素組;（9）CLI-095（TLR4抑制劑）組;（10）CLI-095+20μM蟲草素組;（11）AZD5363（AKT抑制劑）組;（12）AZD5363+20μM蟲草素組;（13）U0126（ERK抑制劑）組;（14）U0126+20μM蟲草素組。各組細(xì)胞培養(yǎng)24⁴8h后,應(yīng)用Brd U-ELISA法檢測細(xì)胞增殖,Annexin V-FITC/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果

1 人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞倒置相差顯微鏡觀察結(jié)果（A:100×，B:400×）的免疫法細(xì)胞鑒定免疫化學(xué)染色法細(xì)胞鑒定結(jié)果顯示，有 95%以胞質(zhì)中含有棕黃色顆粒，胞核被蘇木素染色后呈B

圖 4 蟲草素促進(jìn) SIRT1 mRNA 表達(dá)與 mTOR 信號通路關(guān)系注：SIRT1：沉默信息調(diào)節(jié)因子 2 同源蛋白 1；mTOR：哺乳動物雷帕霉素靶蛋白。A.實時熒光定量 PCR 基因的擴(kuò)增曲線。B.實時熒光定量 PCR 基因的溶解曲線。C.不同處理組 SIRT1mRNA 相對表達(dá)倍數(shù)比較。與對照組比較，##P＜0.01；與高糖組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與單用雷帕霉素組比較，△P＜0.05；與 10μM 蟲草素組相比，▲P＜0.05。2.3.3 蟲草素與 ERK、AKT 信號通路在促進(jìn) SIRT1 mRNA 表達(dá)中的作用按實驗分組干預(yù) 48h 后，相對定量 PCR 法測定各組 SIRT1 mRNA 表達(dá)水平。與對照組比較，高糖組細(xì)胞 SIRT1mRNA 表達(dá)明顯降低（P＜0.01）；與高糖組比較，白藜蘆醇組、單用蟲草素組、單用 AZD5363（AKT 抑制劑）的 SIRT1 mRNA表達(dá)明顯升高（P＜0.05）；與單用蟲草素組比，蟲草素+AZD5363 組 SIRT1 mRNA表達(dá)無明顯變化（P＞0.05）；與單用蟲草素組比，蟲草素+U0126（ERK 抑制劑）組細(xì)胞 SIRT1 mRNA 表達(dá)顯著降低（P＜0.05，圖 5）。A

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]蟲草提取物對高糖誘導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型的保護(hù)作用[J]. 阮景明,葉章正,黃華瑋,林帆,余惠珍,朱鵬立.  中華老年心腦血管病雜志. 2013(10)

博士論文
[1]JAK2/STAT通路在人腎小球系膜細(xì)胞衰老過程中的作用研究[D]. 周紅麗.中國醫(yī)科大學(xué) 2010

碩士論文
[1]蟲草素對高糖誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用探討[D]. 林慧榕.福建醫(yī)科大學(xué) 2016
[2]保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞食藥用真菌乙酸乙酯提取物的篩選及機(jī)制探討[D]. 葉章正.福建醫(yī)科大學(xué) 2012



本文編號：2925464