為了建立黃芪生脈飲（Huangqi Shengmai decoction,HSD）中多糖水解單糖的高效液相色譜指紋圖譜,對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供理論支持,用三氟乙酸（Trifluoroacetic acid, TFA）對HSD多糖提取物進(jìn)行水解和PMP（1-phenyl-3-methy-5-pyrazolone）衍生化處理,建立高效液相色譜-紫外法（HPLC-UV）測定多糖水解衍生物,并對其進(jìn)行方法學(xué)考察。采用"中藥指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)"軟件,評價(jià)分析10個(gè)不同批次的HSD中多糖水解單糖的相似度。得到最佳TFA水解濃度為2 mol/L,總多糖樣品5.0 mg時(shí),PMP衍生化條件為PMP用量400μL,反應(yīng)時(shí)間80 min。建立的色譜指紋圖譜精密度、重復(fù)性和穩(wěn)定性的RSD值均小于5%,各批次的相似度均在0.990以上,符合指紋圖譜測定要求,可以用于HSD中多糖水解單糖質(zhì)量的評價(jià)。 

【文章來源】：浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020年03期 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

不同TFA濃度水解對黃芪生脈飲多糖指紋圖譜共有峰面積之和的影響(n=3)

在衍生化反應(yīng)的過程中,反應(yīng)時(shí)間會對衍生化反應(yīng)的程度產(chǎn)生較大影響。從圖2可知:隨著衍生化反應(yīng)時(shí)間的延長,主要共有特征峰的峰面積之和呈先升高后降低的趨勢。隨著衍生化反應(yīng)時(shí)間從30 min延長至100 min,共有峰面積和逐漸升高,當(dāng)衍生化反應(yīng)時(shí)間達(dá)到80 min時(shí),各主要色譜峰的共有峰面積之和達(dá)到最大值,即可反應(yīng)完全。當(dāng)衍生化反應(yīng)時(shí)間超過80 min后,隨著反應(yīng)時(shí)間的繼續(xù)增加,各主要色譜峰的峰面積之和反而下降,說明在這種情況下,反應(yīng)時(shí)間的延長并不能有利于衍生化反應(yīng)的充分進(jìn)行,可能是由于過長的衍生化反應(yīng)時(shí)間導(dǎo)致了一些不明副產(chǎn)物的生成,從而導(dǎo)致各特征峰的共有峰面積之和下降。因此可確定衍生化最佳反應(yīng)時(shí)間為80 min。相比于已經(jīng)報(bào)道過的文獻(xiàn)[4]中衍生化時(shí)間為100 min,本實(shí)驗(yàn)(80 min)減少了操作時(shí)間,提升了工作效率。2) PMP衍生化試劑使用量的篩選

在衍生化反應(yīng)的過程中,衍生化試劑PMP的使用量同樣會對衍生化反應(yīng)的程度產(chǎn)生一定影響。由圖3可知:隨著衍生化試劑使用量的增加,主要共有特征峰的峰面積之和呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。當(dāng)衍生化試劑的使用量高于400 μL時(shí),隨著PMP使用量的繼續(xù)增加,各主要色譜峰的峰面積之和反而下降,說明在這種情況下,PMP用量的增大影響了衍生化反應(yīng)的充分進(jìn)行,可能是由于過量的衍生化試劑導(dǎo)致反應(yīng)過程中副產(chǎn)物的生成,各特征峰的共有峰面積之和下降。因此可確定當(dāng)總多糖樣品為5.0 mg時(shí),衍生化試劑PMP使用量為400 μL時(shí)衍生化反應(yīng)效果較好。傳統(tǒng)的衍生化反應(yīng)過程中[14],通常使用過量的PMP,而強(qiáng)酸性溶液中含有堿性基團(tuán)的PMP,由于PMP的質(zhì)子化,很難在高效液相色譜分析之前被氯仿完全萃取。因此當(dāng)總多糖樣品為5.0 mg時(shí),衍生化試劑PMP的使用量為400 μL不僅滿足所有衍生物峰面積之和最大,且檢測靈敏度最高,一定程度上減少了溶劑的使用量,符合現(xiàn)代綠色化學(xué)的理念。2.2 色譜條件的優(yōu)化

【參考文獻(xiàn)】：
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