目的研究芒柄花素誘導(dǎo)人乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡的作用及氧化應(yīng)激機(jī)制。方法采用MTT法檢測不同劑量的芒柄花素（8、16、32、64、128μmol·L-1）作用48 h后人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖抑制率; Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測MCF-7細(xì)胞的凋亡率; DCFH-DA熒光標(biāo)記檢測MCF-7細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）的水平; Rhodamine123探針染色分析芒柄花素及其聯(lián)合NAC對MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位（MMP）的影響; Western Blot法分析芒柄花素及其聯(lián)合NAC對Bcl-2、Bax、caspase-3、JNK及P-JNK蛋白表達(dá)水平的影響;分光光度法測定MCF-7細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激相關(guān)的3種抗氧化酶:超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）的活力。結(jié)果芒柄花素能顯著抑制MCF-7細(xì)胞的增殖,且呈劑量依賴性,48 h的IC50值為79.1μmol·L-1;隨著芒柄花素劑量的增加凋亡率、ROS水平升高,膜電位降低,與對照組比較,聯(lián)合ROS抑制劑NAC可顯著拮抗此作用;與對照組比較,芒柄花素能下調(diào)MCF-7細(xì)胞內(nèi)Bcl... 

【文章來源】：華西藥學(xué)雜志. 2020年04期 第385-391頁

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

芒柄花素對MCF-7細(xì)胞增殖的抑制率

采用AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞的凋亡率。取對數(shù)生長期的MCF-7細(xì)胞，每孔1 m L接種于6孔板(每孔3×105個(gè))中，每組設(shè)3個(gè)平行孔，培養(yǎng)24 h。每孔給藥1 m L，陰性對照組加入培養(yǎng)基，陽性對照組加入2.4μmol·L-1表阿霉素，實(shí)驗(yàn)組分別加入39.5、79、158μmol·L-1芒柄花素，活性氧(ROS)抑制劑組先加入10 mmol·L-1NAC，培養(yǎng)1 h后再加入1 m L 79μmol·L-1芒柄花素，繼續(xù)培養(yǎng)48 h后，收集各組細(xì)胞，于1×103r·min-1離心10 min，棄去上清液，用預(yù)冷的PBS重復(fù)洗滌兩次。先加195μL AnnexinV-FITC結(jié)合液，輕輕重懸細(xì)胞，再依次加入5μL AnnexinV-FITC和10μL PI，輕輕混勻，在室溫下避光孵育30 min后，置冰浴中，用300目篩網(wǎng)過濾，60 min內(nèi)上流式細(xì)胞儀檢測。如圖2所示:與陰性對照組比較，隨著芒柄花素劑量的增加，MCF-7細(xì)胞總凋亡率明顯升高(P<0.01)。與79μmol·L-1芒柄花素組比較，芒柄花素聯(lián)合NAC組的凋亡率顯著低于芒柄花素組(P<0.01)�？赏茰y芒柄花素誘導(dǎo)MCF-7細(xì)胞的凋亡作用與活性氧的升高有關(guān)。1.2.4 細(xì)胞內(nèi)ROS水平的檢測

采用流式細(xì)胞儀檢測人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的MMP。細(xì)胞接種、培養(yǎng)及給藥同“1.2.3”項(xiàng)方法。給藥后，繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集各組細(xì)胞，加入500μL RPMI1640重懸細(xì)胞，避光加入Rhodamine 123溶液，使其終濃度為10μg·m L-1。于37℃下避光孵育20 min，離心收集細(xì)胞，PBS漂洗兩次，用500μL PBS重懸。經(jīng)300目篩網(wǎng)濾過后，用流式細(xì)胞儀在Ex488、Em530處檢測熒光強(qiáng)度。測得各組細(xì)胞MMP的水平見圖4�？瞻讓φ战M為82.30%±0.38%，低劑量組為54.80%±0.77%，中劑量組為38.30%±0.93%，高劑量組為6.10%±1.69%，陽性對照組為40.70%±1.22%。抑制劑組為53.29%±2.35%。由表2可知:與對照組比較，隨著芒柄花素劑量的增加，MMP逐漸降低，差異顯著，抑制劑組顯著低于中劑量組，表明芒柄花素能降低MCF-7細(xì)胞線粒體膜電位，且此作用與升高ROS有關(guān)。1.2.6 相關(guān)蛋白表達(dá)水平的檢測

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鬼箭錦雞兒中芒柄花素的薄層鑒別及總黃酮的測定[J]. 張玲玲,王楠軻,徐云,劉美君,王曙.  華西藥學(xué)雜志. 2018(02)
[2]姜黃素對D-半乳糖致衰老大鼠氧化應(yīng)激及Nrf2/ARE通路的影響[J]. 郭豫,趙建,趙江燕,姜招峰,張冬雪,黃漢昌.  華西藥學(xué)雜志. 2016(03)



本文編號：2909919