目的探究鐵皮石斛多糖（DOP）能否抑制由腫瘤壞死因子-α（TNF-α）引起的神經(jīng)細胞凋亡,以及其抑制凋亡的最佳濃度。方法分別采用不同濃度的TNF-α對小鼠海馬神經(jīng)元細胞系（HT22）進行培養(yǎng),確定TNF-α誘導HT22細胞凋亡的最佳濃度;再將不同濃度的DOP與最佳濃度的TNF-α共同培養(yǎng)HT22細胞24 h后,采用PCR、Western blot檢測凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達,查找DOP抑制HT22細胞凋亡的最佳作用濃度;之后,同時通過吉姆薩染色、赫斯特（Hoechst）染色、原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(shù)（Tunel）染色、流式細胞術(shù)觀察HT22細胞凋亡數(shù)量及比例的變化。結(jié)果與正常培養(yǎng)組比較,TNF-α可增加HT22細胞中凋亡相關(guān)基因的表達,且最佳濃度為5 ng/ml （P<0.000 1）。與5 ng/ml TNF-α組比較,各濃度DOP均可抑制HT22細胞凋亡基因的表達,其中20μg/ml和25μg/ml DOP組的抑制效果最為明顯（P <0. 001）;且20μg/ml和25μg/ml DOP組相關(guān)蛋白的表達、HT22細胞的凋亡數(shù)量和比例均顯著低于5 ng/ml TNF-α組... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2020年08期 第1214-1220頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

TNF-α誘導HT22細胞凋亡PCR檢測和細胞增殖實驗

DOP抑制HT22細胞凋亡相關(guān)基因和蛋白表達的作用檢測

吉姆薩染色結(jié)果(圖3A)顯示,加入5 ng/ml TNF-α后,深染凋亡細胞數(shù)量較正常培養(yǎng)組增多;與5 ng/ml TNF-α組比較,分別加入20、25 μg/ml DOP后,深染凋亡細胞數(shù)量均減少。Hoechst染色結(jié)果(圖3B)表明,與正常培養(yǎng)組比較,5 ng/ml TNF-α培養(yǎng)HT22細胞24 h后,藍色深染細胞(凋亡細胞)數(shù)量增多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.000 1);分別加入20、25 μg/ml DOP后,其凋亡細胞的數(shù)量與5 ng/ml TNF-α組比較均減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.000 1)。Tunel染色結(jié)果(圖3C)顯示,與正常培養(yǎng)組比較,5 ng/ml TNF-α組綠色凋亡細胞增多,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.000 1);與5 ng/ml TNF-α組比較,分別加入20、25 μg/ml DOP 后,綠色凋亡細胞減少,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。Annexin V/PI凋亡流式細胞術(shù)檢測結(jié)果(圖3D)表明,在加入5 ng/ml TNF-α后,HT22細胞的凋亡比例可達到29.74%,而正常培養(yǎng)組僅為6.97%,說明TNF-α可以增加HT22細胞的凋亡比例;在分別加入20、25 μg/ml DOP后,HT22細胞的凋亡比例分別為22.80%和24.48%,均較5 ng/ml TNF-α組的凋亡比例降低,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),表明濃度為20、25 μg/ml的DOP均可抑制由TNF-α引起的HT22細胞凋亡。3 討論


本文編號：2906768