目的探究鐵皮石斛多糖（DOP）能否抑制由腫瘤壞死因子-α（TNF-α）引起的神經(jīng)細(xì)胞凋亡,以及其抑制凋亡的最佳濃度。方法分別采用不同濃度的TNF-α對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞系（HT22）進(jìn)行培養(yǎng),確定TNF-α誘導(dǎo)HT22細(xì)胞凋亡的最佳濃度;再將不同濃度的DOP與最佳濃度的TNF-α共同培養(yǎng)HT22細(xì)胞24 h后,采用PCR、Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá),查找DOP抑制HT22細(xì)胞凋亡的最佳作用濃度;之后,同時(shí)通過(guò)吉姆薩染色、赫斯特（Hoechst）染色、原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（Tunel）染色、流式細(xì)胞術(shù)觀察HT22細(xì)胞凋亡數(shù)量及比例的變化。結(jié)果與正常培養(yǎng)組比較,TNF-α可增加HT22細(xì)胞中凋亡相關(guān)基因的表達(dá),且最佳濃度為5 ng/ml （P<0.000 1）。與5 ng/ml TNF-α組比較,各濃度DOP均可抑制HT22細(xì)胞凋亡基因的表達(dá),其中20μg/ml和25μg/ml DOP組的抑制效果最為明顯（P <0. 001）;且20μg/ml和25μg/ml DOP組相關(guān)蛋白的表達(dá)、HT22細(xì)胞的凋亡數(shù)量和比例均顯著低于5 ng/ml TNF-α組... 

【文章來(lái)源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020年08期 第1214-1220頁(yè) 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

TNF-α誘導(dǎo)HT22細(xì)胞凋亡PCR檢測(cè)和細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)

DOP抑制HT22細(xì)胞凋亡相關(guān)基因和蛋白表達(dá)的作用檢測(cè)

吉姆薩染色結(jié)果(圖3A)顯示,加入5 ng/ml TNF-α后,深染凋亡細(xì)胞數(shù)量較正常培養(yǎng)組增多;與5 ng/ml TNF-α組比較,分別加入20、25 μg/ml DOP后,深染凋亡細(xì)胞數(shù)量均減少。Hoechst染色結(jié)果(圖3B)表明,與正常培養(yǎng)組比較,5 ng/ml TNF-α培養(yǎng)HT22細(xì)胞24 h后,藍(lán)色深染細(xì)胞(凋亡細(xì)胞)數(shù)量增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1);分別加入20、25 μg/ml DOP后,其凋亡細(xì)胞的數(shù)量與5 ng/ml TNF-α組比較均減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1)。Tunel染色結(jié)果(圖3C)顯示,與正常培養(yǎng)組比較,5 ng/ml TNF-α組綠色凋亡細(xì)胞增多,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.000 1);與5 ng/ml TNF-α組比較,分別加入20、25 μg/ml DOP 后,綠色凋亡細(xì)胞減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。Annexin V/PI凋亡流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果(圖3D)表明,在加入5 ng/ml TNF-α后,HT22細(xì)胞的凋亡比例可達(dá)到29.74%,而正常培養(yǎng)組僅為6.97%,說(shuō)明TNF-α可以增加HT22細(xì)胞的凋亡比例;在分別加入20、25 μg/ml DOP后,HT22細(xì)胞的凋亡比例分別為22.80%和24.48%,均較5 ng/ml TNF-α組的凋亡比例降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),表明濃度為20、25 μg/ml的DOP均可抑制由TNF-α引起的HT22細(xì)胞凋亡。3 討論


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