目的:探索白藜蘆醇、紅景天苷與氮氧自由基結(jié)構(gòu)衍生物的抗輻射活性。方法:采用CCK-8法檢測部分白藜蘆醇、紅景天苷和氮氧自由基結(jié)構(gòu)衍生物對BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞存活率的影響;DCFH-DA熒光探針標(biāo)記法檢測結(jié)構(gòu)衍生物對輻射誘導(dǎo)的BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞內(nèi)ROS水平的影響;采用CCK-8法,DCFH-DA熒光探針標(biāo)記法檢測Jurkat T細(xì)胞,進(jìn)行實驗條件摸索,建立篩選體系并對化合物進(jìn)行篩選;Annexin-V/PI雙染法法檢測結(jié)構(gòu)衍生物對輻射誘導(dǎo)的Jurkat T細(xì)胞凋亡的影響,以篩選出具有一定輻射保護(hù)效應(yīng)的苗頭化合物;PI染色法評價苗頭化合物對輻射誘導(dǎo)的Jurkat T細(xì)胞周期阻滯的影響;為進(jìn)一步探究苗頭化合物的抗輻射保護(hù)作用機(jī)制,以Western blot法檢測苗頭化合物對凋亡相關(guān)蛋白及其信號通路中關(guān)鍵蛋白的表達(dá)水平的影響;用JC-1熒光探針摻入法檢測苗頭化合物對輻射誘導(dǎo)的Jurkat T細(xì)胞線粒體膜電位變化的影響;細(xì)胞色素c檢測法評價苗頭化合物對輻射誘導(dǎo)的Jurakt T細(xì)胞線粒體產(chǎn)生和釋放細(xì)胞色素c的影響。結(jié)果:（1）BALB/c小鼠脾臟細(xì)胞的輻射敏感性較高,具有中等輻射敏感性... 

【文章來源】：宜春學(xué)院江西省

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

JurkatT細(xì)胞輻射劑量梯度摸索參考之前的研究結(jié)果，我們可以看出輻射劑量的選擇極其重要，如果輻射劑量過大會導(dǎo)致大部分活細(xì)胞死亡，出現(xiàn)輻射后反而胞內(nèi)ROS降低的非正常情況，

第一部分 抗輻射藥物篩選體系的建立如果輻射劑量過小會導(dǎo)致無法誘導(dǎo)出明顯的氧化應(yīng)激，影響判斷結(jié)構(gòu)衍生物的活性。由這次實驗結(jié)果可以看出，在 0，2，4，6，10，15Gy 的輻射劑量范圍，隨著輻射劑量的增大，在 0~6 Gy 劑量范圍內(nèi)，細(xì)胞存活率沒有較大改變，且胞內(nèi)ROS 升高明顯。而 6~15 Gy 劑量范圍內(nèi)，細(xì)胞存活率明顯下降，由于細(xì)胞的死亡，導(dǎo)致胞內(nèi) ROS 降低，故后續(xù)實驗采用 6 Gy 的輻射劑量進(jìn)行開展。6.3 部分白藜蘆醇、紅景天苷與氮氧自由基結(jié)構(gòu)衍生物對輻射誘導(dǎo)的 Jurkat T 細(xì)胞胞內(nèi) ROS 升高水平的影響

23圖 1 結(jié)構(gòu)衍生物對輻射誘導(dǎo)的 Jurkat T 細(xì)胞胞內(nèi) ROS 升高水平的影響注：*P＜0.05，***P＜0.01，與 6 Gy 組相比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。，流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果（見圖 1）顯示，經(jīng)過 6Gy 的 X 射線輻射后，JurkatT細(xì)胞內(nèi)的 ROS 水平相比于未經(jīng)任何處理的對照組有明顯上升，經(jīng)過兩個系列化合物（1,10,100 μM）預(yù)處理的細(xì)胞，呈現(xiàn)出截然不同的結(jié)果。紅景天苷原型幾乎不具有降低 ROS 的活性，其與氮氧自由基的結(jié)構(gòu)衍生物 CSP-NPS 在高濃度（100μM）可以降低胞內(nèi) ROS，參考其細(xì)胞毒性實驗結(jié)果，考慮降低 ROS 的原因可能是由于毒性造成活細(xì)胞死亡導(dǎo)致的。而白藜蘆醇系列化合物在中高劑量均能顯著降低 Jurkat T 細(xì)胞胞內(nèi) ROS 水平，參考細(xì)胞毒性實驗結(jié)果，結(jié)構(gòu)衍生物（CSP-NPR-1，CSP-NPR-2，CSP-NPR-3）即改善了白藜蘆醇的細(xì)胞毒性，也具


本文編號：2902917